[发明专利]一种表位多肽串联混合物在抗立氏立克次体的免疫保护中的应用

说明书

本发明公开了一种表位多肽串联混合物在抗立氏立克次体的免疫保护中的应用。本发明的发明人发现立氏立克次体的一种表位多肽串联混合物作为一种抗原，能够刺激机体产生免疫应答对抗立氏立克次体毒株攻击，为具有落基山斑点热疫苗功能的保护性抗原。此表位多肽串联混合物可通过基因工程制备，其与菌体蛋白疫苗相比，具有制备方法简单、成本低、产量高、更安全等优点。本发明对于落基山斑点热的防疫和治疗具有重大价值。

技术领域

本发明涉及一种表位多肽串联混合物在抗立氏立克次体的免疫保护中的应用。

背景技术

立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)作为一种革兰氏阴性染色的胞内寄生小杆菌，是斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia,SFGR)中毒力最强的一个种，为落基山斑点热(Rocky Mountain Spotted Fever,RMSF)的病原菌，RMSF在自然界主要通过蜱叮咬传播，在北美地区分布广泛。由于立氏立克次体的高致病性、致死率以及可经气溶胶形式传播，它已被列为生物战剂之一和潜在的生物恐怖剂。

落基山斑点热是一种严重威胁人类健康的人兽共患自然疫源性疾病，最早在美国被发现。RMSF患者的早期临床表现主要有高热、头痛和肌肉酸痛，如若治疗不及时，立氏立克次体在体内迅速扩散，后期病情严重者可出现血压下降、急性肺水肿、肾衰和/或循环衰竭，并发心和脑后遗症，在暴发型病例可因心跳突然停止而死亡。在无有效抗生素治疗的情况下，RMSF致死率高达60-80％。并且RMSF早期症状缺乏特异性，很难与其他疾病相区分，难以做到早发现早治疗。有效疫苗预防接种诱导机体产生持久的抗立氏立克次体特异性免疫是预防RMSF发生和流行的最有效手段。

二十世纪内，RMSF疫苗的研制主要集中在灭活疫苗上。初期，研究人员主要采用立氏立克次体感染蜱的内脏匀浆或纯化鸡胚卵黄囊中培养的立氏立克次体后制备甲醛灭活的立氏立克次体全菌疫苗(whole cell vaccine,WCV)，但研究表明免疫保护效果并不理想。1975年美国陆军传染病研究所用鸡胚成纤维细胞培养立氏立克次体后通过蔗糖密度梯度离心纯化，将纯化菌体用甲醛灭活后制成灭活疫苗，在随后进行的人体保护性试验中证明该疫苗可以保护1/4的接种者，接种后患者的发热反应减轻，四环素的治疗更有效，但是该灭活疫苗仅提供有限的保护作用，远没有达到有效疫苗保护标准。另外制备立氏立克次体灭活疫苗通常需要细胞或鸡胚大量培养立克次体，其纯化的防护要求高、工艺复杂、费时费力，因此难以大量制备和推广使用。

随着分子生物学和蛋白质组学技术的快速发展以及对RMSF疫苗研究的不断深入，人们将目光转向了亚单位疫苗研究。研究发现立氏立克次体外膜蛋白A(OmpA)、外膜蛋白B(OmpB)免疫产生的抗体可以中和立克次体对小鼠的致死毒性，给予OmpA及OmpB的单克隆抗体可以保护豚鼠有效抵抗致死剂量的立氏立克次体的感染并交叉保护小鼠抵抗死剂量的康氏立克次体(R.conorii)的感染。另外，研究证明立氏立克次体YbgF免疫也能提供小鼠抗立氏立克次体的特异性免疫保护。这些单一表面蛋白尽管具有一定的免疫保护作用，但是其免疫保护效果有限苗。因此，鉴定立氏立克次体的保护性抗原表位，研发更加安全、有效、持久的亚单位疫苗对预防RMSF具有重大的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种表位多肽串联混合物在抗立氏立克次体的免疫保护中的应用。

本发明首先保护一种重组多表位肽，包括序列表的序列1至序列12所示的表位肽。

所述重组多表位肽由序列表的序列1至序列12所示的表位肽组成。

所述重组多表位肽是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列13所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列13的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列13衍生的蛋白质。