[发明专利]一种大量获得甜叶菊叶片产物甜菊糖苷RM的方法

说明书

本发明提供了一种大量获得甜叶菊叶片产物甜菊糖苷RM的方法，属于生物技术领域，从甜叶菊植株叶片中提取出甜菊糖苷粗提取液，用甜菊糖苷粗提取液介入培养甜叶菊的同科植物，利用甜叶菊的同科植物的生长优势扩大培养并大量获得该同科植物的成熟叶片，和/或利用该同科植物叶片生长富集甜菊糖苷RM的作用，从该同科植物的成熟健壮的叶片中提取出高含量的甜菊糖苷RM的过程。该方法利用甜叶菊的同科植物的生长优势扩大培养，可以大大增加甜菊糖苷RM的产量。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种大量获得甜叶菊叶片产物甜菊糖苷RM的方法。

背景技术

甜叶菊为菊科(Compositae)甜叶菊属(Stevia)草本植物，原产南美巴拉圭地区，其叶片中含有甜菊糖苷(stevioside,ST)，其甜度为蔗糖的200-300倍，是天然的高甜度低能量型甜味物质。经现代科学证明，甜叶菊对高血压、糖尿病、动脉硬化、冠心病患者有较好的防治效果，喝甜菊茶，能帮助解除精神疲劳，促进新陈代谢，有益于人体健康。目前，已有研究表明甜菊糖苷类物质有，莱鲍迪苷A(Rebaudioside A，RA)、RB、RC、RD、RM等多种化合物。其中斯替维苷(ST)和瑞鲍迪苷A(RA)所占比例最大(一般在90％以上)，瑞鲍迪苷C(RC)、杜尔克苷A(DA)、甜菊双糖苷(RM)的含量较少。从不同甜菊糖苷成分的口感分析结果表明，糖基多的甜菊糖苷RA和RM比糖基少的甜菊糖苷ST味道更甜。近年来研究证明，甜叶菊中的甜菊双糖苷RM的甜度高于甜菊双糖苷RA，而苦味比甜菊双糖苷RA和ST弱，因而甜叶菊中的甜菊糖苷RM成分将具有更广的应用前景。但是，目前甜叶菊叶片中甜菊糖苷RM含量较少，如果甜菊糖苷RM成分能够在同科植物的菊花体内富集，而菊花植株比甜叶菊植株生物量大，则甜菊糖苷RM的产量将大大增加。

菊花(Chrysanthemum morifolium Rmat.)为菊科菊属多年生草本植物。菊花原产我国，具有1600多年的栽培历史。目前我国菊花品种超过3000多个，栽培面积达到8900公顷。菊花主要用于园林绿化、地被、室内装饰、茶用、药用以及酿酒等。目前菊花用于茶用的品种已筛选的‘皇冠’花朵呈鲜黄色、花朵大小约13cm，泡出的汤色金黄，非常适合做茶用菊花，因而其栽培面积不断扩大。但目前的茶用菊花‘皇冠’花朵泡出的茶味虽甘甜但略带苦味。如果利用甜叶菊中的甜菊糖苷提取液，能使茶用菊花的茶味更加甘甜，则其市场前景将会非常广阔。

发明内容

本发明提供了一种大量获得甜叶菊叶片产物甜菊糖苷RM的方法，该方法是从甜叶菊植株叶片中提取出甜菊糖苷粗提取液，用甜菊糖苷粗提取液介入培养甜叶菊的同科植物，利用甜叶菊的同科植物的生长优势扩大培养并大量获得该同科植物的成熟叶片，和/或利用该同科植物叶片生长富集甜菊糖苷RM的作用，从该同科植物的成熟健壮的叶片中提取出高含量的甜菊糖苷RM的过程。

优选的，所述的甜叶菊的同科植物采用菊花植株。

优选的，所述的用甜菊糖苷粗提取液介入培养甜叶菊的同科植物的介入培养的方式为：用甜菊糖苷粗提取液全株喷施甜叶菊的同科植物的植株。

优选的，所述的全株喷施方法是：先将甜菊糖苷粗提取液稀释3～40倍，利用喷雾器，在甜叶菊的同科植物植株上全株喷施，每星期喷施1～5次，每次间隔大于24h，连续喷施10-30次；末次喷施后间隔一星期收取该同科植物的成熟健壮的叶片用于提取出甜菊糖苷RM。

优选的，所述的从甜叶菊植株叶片中提取出甜菊糖苷粗提取液的工艺采用纤维素酶法提取方式：将甜叶菊植株叶片于40～85℃干燥至恒重、粉碎、过滤过筛后得到粉末，粉末中加入纯净水和纤维素酶，于40～85℃水浴15-85min酶解反应后，抽滤，离心后，取上清液；针对离心残渣，进一步加入纯净水和纤维素酶后，在40～85℃水浴中加热5～50min，抽滤，取滤液；上清液和滤液混合，在混合液中加入絮凝剂，在35～85℃水浴中水浴，除杂质后，搅拌过滤到容量瓶中定容，获得甜叶菊叶片中的甜菊糖苷粗提取液。