[发明专利]BAK1基因及扩增方法、引物、植株过表达载体、转基因株系

说明书

本发明属于DNA重组技术领域，公开了一种BAK1基因及扩增方法、引物、植株过表达载体、转基因株系，首次构建了Pcambia1301‑35S‑MdBAK1过量表达载体，并通过浸花法将其在拟南芥中过量表达；苹果MdBAK1基因过表达和野生型拟南芥生物量、株高、平均节间长度、节位数和茎粗等差异情况。本发明提高了拟南芥生物量、株高、平均节间长度、节位数和茎粗。本发明的苹果MdBAK1基因分别通过增大拟南芥主茎细胞长度和横截面积增加植物株高和茎粗。苹果MdBAK1基因在调控拟南芥生长方面，诱导了生长相关基因的表达。本发明增强了拟南芥对外源BR信号的敏感性且抑制了BR合成基因表达。

技术领域

本发明属于DNA重组技术领域，尤其涉及一种BAK1基因及扩增方法、引物、植株过表达载体、转基因株系。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：BR信号受体基因BAK1是植物中广泛存在且保守的一类植物受体激酶基因。目前BAK1基因在拟南芥和水稻上相继被发现。BAK1是一个典型的富亮氨酸重复序列的跨膜受体激酶,包括三个主要的结构域：胞外结合域、跨膜区以及胞内激酶结构域。BAK1基因在BR信号转导、植物生长和响应生物及非生物逆境等方面发挥着重要的作用。但是，有关BAK1基因调控植物生物量、主茎和叶片生长的研究进展较小。BAK1基因在植物逆境响应方面的研究进展明显大于其调控植物生长发育方面的研究。而且，有关BAK1基因的研究集中于拟南芥和水稻二种模式植物上。相对于其它植物激素信号受体基因而言，发现BAK1基因的时间较晚，其研究历史较短和功能信息缺乏。苹果作为一种多年生的木本果树，其生长发育的调控机理相对复杂、研究条件较为苛刻。在苹果上有关BAK1基因的研究报道尚未见报道。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)BAK1基因的研究集中草本模式植物，在苹果上尚未见报道；

(2)BAK1基因调控植物生长发育的功能研究相对滞后；

(3)相对于模式植物，苹果生长发育的调控机制较为复杂。

解决上述技术问题的难度和意义：苹果在我国果树产业上占据着举足轻重的地位；有效地促进苹果产业的发展对提升我国的经济水平和实现农民增收有着重要的意义；生命力旺盛的苹果幼树能够有效地提升树体抗逆能力、增加树体营养物质代谢和提高果实产量品质等。研究苹果BAK1基因调控植物生长的生理基础及分子机制，有助于全面了解植物的生长发育及促进优良苹果品种的选育。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种BAK1基因及扩增方法、引物、植株过表达载体、转基因株系。

本发明是这样实现的，一种BAK1基因，所述BAK1基因的DNA序列为：SEQ ID NO：1。

本发明的另一目的在于提供一种所述BAK1基因的扩增方法，所述BAK1基因的扩增方法包括：

步骤一，根据苹果基因组中注释的BAK1基因序列，利用Primer6设计全长克隆引物；

步骤二，以苹果幼树T337叶片总RNA反转录合成的cDNA为模板，使用高保真酶扩增得到MdBAK1基因全长序列。

进一步，所述MdBAK1基因含有1851bp的开放阅读框，编码616个氨基酸。

本发明的另一目的在于提供一种所述BAK1基因的扩增方法使用的全长克隆引物。

本发明的另一目的在于提供一种由所述MdBAK1基因构建的Pcambia1301-35S-MdBAK1过表达载体。

本发明的另一目的在于提供一种由所述BAK1基因构建的植株过表达载体。