[发明专利]一种利用蓝藻合成丙烯酸的方法

权利要求书

1.一种利用蓝藻合成丙烯酸的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1)首先，基于蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，再根据蓝藻Syn7942细胞密码子偏好性优化基因ceaS2的密码子，然后将此基因插入到载体NSI上，得到重组载体NSI-ceaS2；

2)基于蓝藻Syn7942在自然状态下能够吸收外源基因的特性，将重组载体NSI-ceaS2转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；

3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至带有氯霉素抗性的液体培养基中，待蓝藻生长出后，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；

4)将验证成功的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至液体培养基，在一定条件下培养，待蓝藻长到OD730大于或等于1时，添加IPTG诱导基因ceaS2的表达，表达的酶以蓝藻光合作用产生的三磷酸甘油醛或磷酸二羟基丙酮为底物为底物合成丙烯酸；

5)对产物丙烯酸进行分离提纯。

2.根据权利要求1所述的利用蓝藻合成丙烯酸的方法，其特征在于：所述步骤2)中氯霉素固体培养基的组成基于专用于培养蓝藻的BG11培养基，添加氯霉素和琼脂，氯霉素终浓度为25-30ug/L，琼脂终浓度为15g/L，所述BG11培养基配方为：

1)磷酸氢二钾3.17g/100ml

2)硫酸镁7.5g/100ml

3)氯化钙3.6g/100ml

4)柠檬酸0.6g/100ml

5)柠檬酸铁铵0.6g/100ml

6)EDTA·2Na·2H₂O 0.105g/100ml

7)碳酸钠2.0g/100ml

8)A5包括：

H₃BO₃ 2.8g/L

MnCl₂·4H₂O 1.81g/L

ZnSO₄·7H₂O 0.22g/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.39g/L

CuSO₄·5H₂O 0.08g/L

CoCl₂·6H₂O 0.01g/L；

配制BG11培养基时，取2)、3)、4)、6)、7)、A5溶液各1mL，加入1.5g NaNO₃，混匀后加蒸馏水定容至1L，然后高温灭菌，等溶液冷却后再往里加入1mL的1)和5)溶液，即完成BG11液体培养基配制。