[发明专利]一种含细菌样品的保存方法、保存液、制备方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种含细菌样品的保存方法、保存液、制备方法及应用。该保存方法采集含细菌样品，并将其与含若干呈化学惰性的球状体的保存液混合，摇匀后保存。通过利用若干呈化学惰性的球状体对保存液中的含细菌样品进行匀质化操作，可实现保存液与含细菌样品的充分混合，进而有效保存含细菌样品中微生物的相对含量，避免微生物因含细菌样品结块等因素所造成的相对比例发生变化的问题。同时该保存液通过合理配置各原料，能有效维持样本中微生物的相对含量不变和有效保存遗传物质。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种含细菌样品的保存方法、保存液、制备方法及应用。

背景技术

目前，对含细菌样品，特别是粪便细菌的研究除了直接采集新鲜粪便样本研究外，还需要采用化学试剂，对细菌进行破坏，丰度固定或保护，避免细菌核酸等遗传物质在保护期间受到破坏。常见的是将采集的粪便样本放置于保存液中或者将保存液以灌注的方式加入到采集好的粪便样本中。利用保存液冲刷粪便样本或搅拌保存液中粪便样本的模式，进行粪便样本在保存液中的匀质化操作。

但不同人群粪便的性状不同，例如，硬便、稀糊状、冻状便、陶土样便等。粪便样本在保存液中保存时无法利用保存液自身冲刷或搅拌模式完成充分混匀操作，导致粪便样本在保存液中存在结块现象，结块内部的微生物菌群未受到保存液的包裹，会由于外界条件的变化导致微生物组成发生变化。特别是有些带有一定黏着性的样本，搅拌或手动摇匀的方式，效果会非常差。同时，现有技术中采用的保存液的组成一般为氯丁醇和EDTA-Na₂等，其保护粪便中的细菌组成及维持细菌相对比例的稳定的能力有限。

另外，保存液要与粪便中的微生物细胞充分接触方能发挥更好的作用。在粪便充分混匀(匀质)的基础上，更有利于保持微生物相对比例(充分固定微生物)不变，且有效保存遗传物质(核酸)。在保存液中不能充分混匀的结块内部正是保存液不能发挥作用的部分，进而会影响到整个粪便样本的结果，使其结果不能完全代表样本。

发明内容

为此，本发明所要解决的是现有含细菌样品的保存方法不能有效维持样本中微生物的相对含量不变和有效保存遗传物质的缺陷，进而提供一种能有效维持样本中微生物的相对含量不变和有效保存遗传物质的含细菌样品的保存方法、保存液、制备方法及应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

本发明所提供的保存液，其包括如下浓度的原料：

进一步地，所述保存液的pH为7.5～8.5。

例如，1L保存液中含有150-220g氯化钠、1.65-101g乙二胺四乙酸、100-300mL二甲基亚砜、1.45-7.36g柠檬酸钠，用水补至1L。

此外，本发明还提供了上述保存液的制备方法，包括如下步骤：

将上述各原料混合，并补水，得到混合液；

调节所述混合液的pH至7.5～8.5，再进行过滤，得到所述保存液。

进一步地，所述过滤为将调节pH后的混合液通过0.22μm滤膜进行过滤。

此外，本发明还提供了上述保存液在保存含细菌样品中的应用。

进一步地，所述含细菌样品为粪便、唾液、土壤、沙石、沙土或肥料。优选为粪便。

此外，本发明还提供了一种试剂盒，包括上述保存液。

进一步地，所述保存液中包括呈化学惰性的球状体。

进一步地，将所述保存液分装于储样装置中，所述保存液的体积为所述储样装置体积的0.5-0.7倍，优选为0.6倍；

所述球状体的直径为所述储样装置内径的0.8倍以下，优选为0.5倍以下。