[发明专利]一种基于UHPLC-QTrap MS检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法

说明书

本发明涉及分析化学领域和脂质组学研究领域，具体而言，涉及一种基于UHPLC‑QTrap MS检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法，在进行所述UHPLC测定斑马鱼脑组织蛋白的提取液时，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；所述流动相A为0.3v/v％～0.5v/v％的甲酸水溶液；所述流动相B为体积比为40：(50～70)的0.07v/v％～0.13v/v％的甲酸水溶液：异丙醇。本方法可实现对斑马鱼脑组织中46种鞘脂类物质同步定量和定性有效检测，且耗时短、成本低。

技术领域

本发明涉及分析化学领域和脂质组学研究领域，具体而言，涉及一种基于UHPLC-QTrap MS检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法。

背景技术

斑马鱼(英文名：Danio rerio)，是一种常用的毒理学评价模式生物。与其它模式生物相比，斑马鱼具有天然的内在优势。首先，斑马鱼易获得、易饲养，可在实验室实现规模养殖。其次，斑马鱼传代周期短，可满足试验要求。最重要的是，斑马鱼的基因与人类基因相似度高达87％。基于以上优点，斑马鱼常作为模式生物对农药、兽药、持久性有机污染物及新型环境污染物等进行毒理学评价。

鞘脂(sphingolipids)是一类含有鞘氨醇骨架的两性脂，一端连接着一个长链的脂肪酸，另一端为一个极性的醇。鞘脂主要包括鞘磷脂、脑苷脂和神经节苷脂等，主要存在于动物的生物膜上，尤其是在神经细胞的轴突和髓鞘质含量尤为丰富。目前对于脂质组学的研究还处于起步阶段，对于鞘脂的研究也尚未成熟。但复杂的结构赋予了鞘脂许多重要的生理功能，如作为信号分子在细胞生长、分化、衰老和死亡中起到重要作用。当生物体或细胞受到威胁时，内部的鞘脂代谢会发生，从而在含量上表现出明显的上调或下调。所以，鞘脂对于化学污染物对生物神经系统的影响方面具有重要的指示性作用。

目前，对斑马鱼脑组织中鞘脂的定量检测方法还未见报道，所以开发斑马鱼脑组织中鞘脂的快速和灵敏的检测方法具有重要现实意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于UHPLC-QTrap MS(超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱)检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法，该方法的优点是简单，快速，准确，稳定，并且是首次以基于UHPLC-QTrap MS技术的非靶向代谢组学技术应用于斑马鱼不同鞘脂的检测与鉴别。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

根据本发明的一方面，本发明涉及一种基于UHPLC-QTrap MS检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法，其特征在于，在进行所述UHPLC测定斑马鱼脑组织蛋白的提取液时，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；

所述流动相A为0.3v/v％～0.5v/v％的甲酸水溶液；

所述流动相B为体积比为40：(50～70)的0.07v/v％～0.13v/v％的甲酸水溶液：异丙醇。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明提供的方法，以超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱技术为基础，采用AB SCIEX QTRAP 6500+，通过对其参数进行优化，建立了检测斑马鱼脑组织中46种鞘脂的定量方法。另外，采用线性离子阱质谱的信息依赖扫描(IDA)模式，还可以在定量分析的同时获得相关鞘脂的二级碎片质谱图，从而可以跟谱库进行匹配而实现准确定性的目的。本发明的方法可实现对上述鞘脂类物质的同步定量和定性有效检测，且耗时短、成本低。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱图；