[发明专利]一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用

权利要求书

1.一种总胆汁酸检测试剂，其特征在于，包括酶反应液，所述酶反应液包括如下重量百分比的组分：

3α-羟基类固醇脱氢酶1.0%-2.2%；

铁氰化钾3.0%-20.0%；

羧甲基纤维素1.0%-6.0%；

AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 0.5%-3.0%；

pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%-80%；

医药级蒙脱石钙1.0%-10.0%。

2.一种总胆汁酸检测试纸，其特征在于，包括

一绝缘基片；

一位于绝缘基片上的电极系统，所述电极系统包括三条导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中的短路电极与工作电极或参比电极相接；

一局部覆盖于电极系统上的绝缘隔离层，使得在未覆盖绝缘隔离层所裸露出的电极系统区域，形成一容纳样品溶液空间的电化学电极反应区；

一位于电化学电极反应区的酶反应膜，所述酶反应膜包括至少一种电子介体、至少一种总胆汁酸吸附剂、还包括缓冲液、粘合剂及表面活性剂；

在所述的绝缘隔离层的上方设有一粘合隔片，所述粘合隔片上开设有相互连通的采样口和虹吸导样槽，其中采样口设置于远离绝缘基片上电极传导部的一端，虹吸导样槽的开设位置与绝缘隔离层上电化学电极反应区的位置相对应。

3.根据权利要求2所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述绝缘隔离层的电化学电极反应区设有反应窗口，反应窗口的跨度为同时覆盖工作电极和参比电极；所述酶反应膜与反应窗口相对应。

4.根据权利要求2所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述酶反应膜包括

酶，为3α-羟基类固醇脱氢酶；

电子介体，为铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物中的一种或几种；

缓冲液，为磷酸缓冲液、MES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种；

总胆汁酸吸附剂，为蒙脱石。

5.根据权利要求2或4所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述总胆汁酸吸附剂干重含量为1%-10%。

6.根据权利要求2或4所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述总胆汁酸吸附剂直径为0.5μm -7μm。

7.根据权利要求2或4所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述酶反应膜中的总胆汁酸检测试剂包括如下重量百分比的组分：

3α-羟基类固醇脱氢酶1.0%-2.2%；

铁氰化钾3.0%-20.0%；

羧甲基纤维素1.0%-3.0%；

AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 0.5%-3.0%；

pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%-80%；

医药级蒙脱石钙或医药级蒙脱石钠1%-10%。

8.权利要求2-7任一项所述的总胆汁酸检测试纸在制备总胆汁酸检测试纸中的应用。

9.权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂在制备总胆汁酸检测试纸中的应用。

10.利用权利要求2-7任一项所述的总胆汁酸检测试纸进行总胆汁酸检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

一、制作线性曲线图：

收集比重为1.018的新鲜尿液，配制尿液胆汁酸浓度为0，10, 25, 50,100,200,300μmol/L的尿样；

将总胆汁酸检测试纸置于配套的多参数分析仪中并在工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；

取尿样10-100µL加到总胆汁酸检测试纸的采样口，尿液通过虹吸导样槽自动吸取2µL样品，在多参数分析仪上可检测出与总胆汁酸浓度相对应的电流值；

以总胆汁酸的浓度为横坐标，电流值为纵坐标，绘制出总胆汁酸浓度与电流值的线性关系图；

二、测量被测样品的总胆汁酸浓度值：

将总胆汁酸检测试纸置于多参数分析仪中并在总胆汁酸检测试纸的工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；

取被测样品尿样10-100µL加到总胆汁酸检测试纸的采样口，尿液通过虹吸导样槽自动吸取2µL样品，在多参数分析仪上检测出与取被测样品总胆汁酸浓度相对应的电流值；

该电流值对应的总胆汁酸浓度可直接从上述线性关系图上得出，从而得到被测样品的总胆汁酸浓度值。