[发明专利]一种GII.2型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法

权利要求书

1.一种GII.2型诺如病毒基因组扩增引物，其特征在于，包括六对扩增引物和两条基因组末端的测序引物：

扩增引物对1 ：

II-1F：5'-GTGAATGAAGATGGCGTCTAAC-3'；

II.2-1R：5'- GTCAACTCCATTCCGTGGGA-3'；

扩增引物对2 ：

II.2-2F：5'- AGCCTACATGAAGACCTTGGAC-3'；

II.2-2R：5'-GCTCTTTCTTCCTTGCGTTG-3'；

扩增引物对3 ：

II.2-3F：5'-CACGGCATTCTCAAGCAAAG-3'；

II.2-3R：5'-TCGTCCATCAAACCGCCAAA-3'；

扩增引物对4 ：

II.2-4F：5'-GAGCACTGGAATGGGGAATC-3'；

II-4R：5'-CCRCCNGCATRHCCRTTRTACAT-3'；

扩增引物对5 ：

II-5F：5'-GGAGGGCGATCGCAATC-3'；

II-5R：5'-CCRGCRAAGAAAGCTCCAGCCAT-3'；

扩增引物对6 ：

II.2-6F：5'-AAATTCACCCCAGTTGGAC-3'；

II.2-6R：5'-TCACTAAGCTTGTGACTCC-3'；

测序引物 ：

II.2-seq1R：5'-GCCCTCTTTCCACATACAGTCC-3'；

II.2-seq6F：5'-TGAATGCGCCCATGACACAG-3'；

R代表A/G，H代表A/C/T，N代表碱基A/C/T/G。

2.一种GII.2型诺如病毒基因组扩增方法，其特征在于，分别以权利要求1所述的六对扩增引物对II-1F/II.2-1R、II.2-2F/II.2-2R、II.2-3F/II.2-3R、II.2-4F/II-4R、II-5F/II-5R、II.2-6F/II.2-6R作为扩增引物的上下游引物，以GII.2型诺如病毒的RNA为模板进行RT-PCR扩增，分别得到扩增产物，然后采用权利要求1所述的每对扩增引物和测序引物II.2-seq1R、II.2-seq6F分别对相对应扩增出的扩增产物进行核酸序列测序，再通过拼接比对，获得GII.2型诺如病毒基因组全长序列。

3. 根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反应体系为：含有2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L 下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由双蒸水补足至20μL；反应条件为：50℃反转录30min，94℃预变性3min，然后94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 75s，共30次循环后，最后72℃延伸7min。