[发明专利]一种GI.Pb/GI.6重组型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法

权利要求书

1.一种GI.Pb/GI.6重组型诺如病毒基因组扩增引物，其特征在于，包括六对扩增引物和两条测序引物：

扩增引物对1 ：

I-1F：5'-GTGAATGATGATGGCGTC-3'；

I.b-1R：5'-GCAGAGAGTTTTCTAGCTTT-3'；

扩增引物对2 ：

I.b-2F：5'-TAGCCATTGGATTTACCAG-3'；

I.b-2R：5'-CTCAGTCTCACATAGTCCA-3'；

扩增引物对3 ：

I.b-3F：5'-AAGAACACAAGTGCAAAGTCC-3'；

I.b-3R：5'-GACATGCATCACTGTAACTCCA-3'；

扩增引物对4 ：

I.b-4F：5'-AAGCCATTTGCTGAGCCAC-3'；

G1SKR：5'-CCAACCCARCCATTRTACA-3'；

扩增引物对5 ：

G1SKF：5'-CTGCCCGAATTYGTAAATGA-3'；

I.6-5R：5'-CATTATATACGCCGCAATCC-3'；

扩增引物对6 ：

I.6-6F：5'-CGACATCATAGGTAGCCTT-3'；

I.6-6R：5'-AAATCTGAATATGGTGCCCAC-3'；

测序引物 ：

I.b-seq1R：5'-GCTGGTTCCATATTCCTTAGGTC-3'；

I.6-seq6F：5'-GGTCTCCAGGCTCAACGGTA-3'；

R代表A/G，Y代表C/T。

2.一种GI.Pb/GI.6重组型诺如病毒基因组扩增方法，其特征在于，分别以权利要求1所述的六对扩增引物对I-1F/I.b-1R、I.b-2F/I.b-2R、I.b-3F/I.b-3R、I.b-4F/G1SKR、G1SKF/I.6-5R、I.6-6F/I.6-6R作为扩增引物的上下游引物，以GI.Pb/GI.6重组型诺如病毒的RNA为模板进行RT-PCR扩增，分别得到扩增产物，然后采用权利要求1所述的每对扩增引物以及两条测序引物I.b-seq1R、I.6-seq6F分别对相对应的扩增产物进行核酸序列测定，再拼接比对，获得GI.Pb/GI.6重组型诺如病毒的基因组全长序列。

3. 根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反应体系为：含有2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L 下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由双蒸水补足至20μL，反应条件为：50℃反转录30min，94℃预变性3min，然后94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 75s，共30次循环后，最后72℃延伸7min。