[发明专利]一种高盐度环境下氨基酸的检测方法

说明书

本发明技术方案公开了一种高盐度环境下氨基酸的检测方法，包括如下步骤：S1：蛋白质及肽的去除：向一定量的高盐度氨基酸溶液中加入磺基水杨酸溶液进行沉淀，待寡肽、多肽及蛋白质沉淀完全后，离心收集上清液；S2：配制氨基酸标准溶液：向S1所得上清液中加入一定量pH为7.5～7.8的缓冲液；S3：制备柱前衍生化溶液：将S2所得氨基酸标准溶液用氯甲酸卞酯进行柱前衍生化反应；S4：液相色谱分析：采用液相色谱法对S2所得氨基酸标准溶液和S3所得柱前衍生化溶液进行检测并分析。本发明技术方案的检测方法完全符合一般生产科研需要，弥补了现有技术难以适应在高盐度条件下，对氨基酸各组分进行准确分析的缺陷，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及氨基酸检测技术领域，尤其涉及一种高盐度环境下氨基酸的检测方法。

背景技术

氨基酸是一种含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是一种广泛用于饲料添加剂、食品添加剂、肥料添加剂，也是保健用品、化妆用品、医药用品和化学工业的基础原料。随着氨基酸的应用范围扩大，其定性定量的分析方法，越来越受到人们的关注和研究。近年来，用液相色谱法分析检测氨基酸发展很快，尤其是各种柱前和柱后衍生方法的发展，较大地改进了液相色谱法的选择性和灵敏度，使之适用于不同的分析对象。

目前常用的氨基酸全自动分析仪就是以柱后衍生为主的分析方法，具有全自动、高精度的特点，同时也存在着仪器本身价格高、衍生试剂贵等缺点，同时各种柱前衍生法的应用已趋于成熟，目前已报道的柱前衍生试剂很多，常用的有邻苯二甲醛(OPA)、丹酰氯(二甲氨基萘磺酰氯，Dansyl-Cl)、磺酰氯二甲胺偶氮苯(Dabsyl-Cl)、2,4-二硝基氟苯(FDNB)、异硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(9-芴基甲氧基羰酰氯，FMOC)等。

虽然各柱前衍生方法均具有各自的优点，无论是柱后衍生液相色谱分析方法，还是柱前衍生液相色谱分析方法，都难以适应在高盐度条件下，对氨基酸各组分进行准确分析，在现有常用的化肥产品中，氨基酸水溶肥就是一种高含盐量的氨基酸悬浮液，因此，有必要开发一种适合分析高浓度盐分氨基酸的检测方法。

发明内容

本发明技术方案所要解决的技术问题是提供一种适合分析高浓度盐分氨基酸的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明技术方案提供了一种高盐度环境下氨基酸的检测方法，包括如下步骤：

S1：蛋白质及肽的去除：向一定量的高盐度氨基酸溶液中加入磺基水杨酸溶液进行沉淀，待寡肽、多肽及蛋白质沉淀完全后，离心收集上清液；

S2：配制氨基酸标准溶液：向S1所得上清液中加入一定量pH为7.5～7.8的缓冲液；

S3：制备柱前衍生化溶液：将S2所得氨基酸标准溶液用氯甲酸卞酯进行柱前衍生化反应；

S4：液相色谱分析：采用液相色谱法对S2所得氨基酸标准溶液和S3所得柱前衍生化溶液进行检测并分析。

可选的，所述步骤S1具体为：向一定量的高盐度氨基酸溶液中加入磺基水杨酸溶液，搅拌10～20min后，在转速为10000～12000rpm的条件下离心10～20min，取上层清液，其中所述高盐度氨基酸溶液与所述磺基水杨酸的质量比为1:8～1:12，所述磺基水杨酸溶液的浓度为0.8～1.2M。

可选的，在步骤S2中，所述缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

进一步可选的，所述上清液与所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的质量比为1:(10～30)。

可选的，在步骤S3中，所述氨基酸标准溶液与所述氯甲酸卞酯的质量比为1:(1.2～1.5)，反应在搅拌下进行，反应温度为40～50℃，反应时间为1～2h。