[发明专利]十六元大环内酯类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.十六元大环内酯类化合物，其结构通式如式I所示：

其中，X-Y为CH₂-CH(OH)或CH＝CH。

2.生产权利要求1所述的十六元大环内酯类化合物的链霉菌，所述链霉菌通过以下步骤构建：

以基因工程菌DM-209为出发菌株，将编码糖基转移酶的aveBI基因失活，即得；

所述DM-209是以ATCC NO:31267产阿维菌素的除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)为出发菌株，通过bkdF和aveD基因失活获得的基因工程菌；

将所述aveBI基因失活的方法为同源重组双交换法，包括以下步骤：将重组质粒pUAB-2转化大肠杆菌，得到转化子，再将所述转化子接合转移到所述基因工程菌DM-209，挑取同源重组双交换子；

所述重组质粒pUAB-2的构建包括以下步骤：用除虫链霉菌aveBI基因的同源重组左臂片段替换pSPD1的HindIII和XbaI酶切位点间片段，并且用aveBI基因的同源重组右臂片段替换其XbaI和ClaI酶切位点间片段；

所述pSPD1的序列如SEQ ID No.3所示；

所述aveBI基因的同源重组左臂片段是以所述除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)基因组DNA为模板，以SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示的DNA片段为引物进行PCR扩增得到；

所述aveBI基因的同源重组右臂片段是以所述除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)基因组DNA为模板，以SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示的DNA片段为引物进行PCR扩增得到。

3.权利要求2所述链霉菌的构建方法，包括以下步骤：以基因工程菌DM-209为出发菌株，将编码糖基转移酶的aveBI基因失活，即得；

所述DM-209是以ATCC NO:31267产阿维菌素的除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)为出发菌株，通过bkdF和aveD基因失活获得的基因工程菌；

将所述aveBI基因失活的方法为同源重组双交换法，包括以下步骤：将重组质粒pUAB-2转化大肠杆菌，得到转化子，再将所述转化子接合转移到所述基因工程菌DM-209，挑取同源重组双交换子；

所述重组质粒pUAB-2的构建包括以下步骤：用除虫链霉菌aveBI基因的同源重组左臂片段替换pSPD1的HindIII和XbaI酶切位点间片段，并且用aveBI基因的同源重组右臂片段替换其XbaI和ClaI酶切位点间片段；

所述pSPD1的序列如SEQ ID No.3所示；

所述aveBI基因的同源重组左臂片段是以所述除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)基因组DNA为模板，以SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示的DNA片段为引物进行PCR扩增得到；

所述aveBI基因的同源重组右臂片段是以所述除虫链霉菌MA-4680(Streptomycesavermitilis MA-4680)基因组DNA为模板，以SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示的DNA片段为引物进行PCR扩增得到。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌ET12567(Escherichia coli ET12567)。

5.权利要求1所述十六元大环内酯类化合物的制备方法，所述方法为生物制备法，其中所述生物制备法为发酵权利要求2所述的链霉菌。

6.如下所述的物质在防治农林害虫中的应用：

权利要求1所述的十六元大环内酯类化合物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述农林害虫为鳞翅目粉蝶科中的一种或多种和/或垫刃目滑刃总科中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述鳞翅目粉蝶科的害虫为菜青虫；所述垫刃目滑刃总科的害虫为松材线虫。