[发明专利]一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆

说明书

本发明属于生物医药技术领域，公开了一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N‑乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为常规细胞培养基。本发明还提供了利用该细胞培养液提取血小板血浆的方法。本发明提供的细胞培养液配方简单，成本低，可有效促进血液中的血小板及白细胞分泌有益生长因子。该细胞培养液与本发明提供的富血小板血浆的制备方法相结合，可快速制备含有大量有益生长因子并且无污染可直接注射的富血小板血浆，可有效治疗脂溢性脱发。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆。

背景技术

脂溢性脱发的患者往往由于雄激素在局部组织中代谢异常，通过5α还原酶的作用使活性低的睾酮转化为活性高的二氢睾酮(DHT)，而DHT与雄激素受体有很强的亲和力，可与雄激素受体结合而进入细胞核起作用，使毛囊过早成熟，生长期缩短而提前进入休止期，毛囊渐变小，毛发变得细短，进而脱发，目前对于脱发的治疗一般是采用植发，还没有有效的手段可使脱发患者在短时间内生发。富血小板血浆(PRP)是利用自身血液制作的富含血小板的高浓度血浆，其中包含多种生长因子如血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子TGF-β1、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子IGF-I、IGF-II、纤维蛋白、纤维结合蛋白分子、促进炎症反应、细胞增殖和分化等的因子，在创面损伤修复中应用较广。

然而，目前PRP的提取主要是二次离心法，主要存在以下缺点：开放式的制备体系容易受到外界污染，提取PRP时在多个容器间转移，增加了血小板被污染和激活的机率，操作人员的个人操作习惯极大地影响了PRP中血小板的浓度，以上因素导致制备的PRP中血小板获取率较低且各指标变异系数大，极大程度地限制了PRP的应用。因此，急需开发一种能快速提取含有大量有益成分且不易污染的PRP的方法。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆。

本发明所采用的技术方案为：

本发明提供了一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为常规细胞培养基。

具体的，上述细胞培养液，所述N-乙酰氨基酸中的氨基酸L-蛋氨酸、L- 苏氨酸、L-组氨酸、L-谷氨酰胺、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸或L-缬氨酸，所述支链氨基酸为亮氨酸。

具体的，上述细胞培养液，所述细胞培养基为DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。

本发明还提供了一种富血小板血浆的制备方法，包括以下步骤：

S1：取外周血，向外周血中加入前述的细胞培养液，混匀，得到混合液一；

S2：将上述混合液一静置培养，得到混合液二；

S3：将步骤S2所述的混合液二离心，取上清液和中间细胞层，即得到所述富血小板血浆。

具体的，上述制备方法，所述步骤S1中外周血的体积与所述细胞培养液的比例为20:1。

具体的，上述制备方法，所述步骤S2中培养的温度为37℃，培养时的CO₂浓度为5％，培养时间为4h。

具体的，上述制备方法，所述步骤S3中离心时离心力为26G，离心时间为 15min。

一种通过前述制备方法制备的富血小板血浆。

本发明的有益效果为：