[发明专利]通用隔断超快扩增镁、钠切割型功能核酸可视化检测方法

权利要求书

1.一种快速检测镁、钠离子的系统，其特征在于，包括：(1)切割体系，(2)sPCR扩增体系，(3)HCR体系，(4)包含ABTS显色液的检测体系；

所述检测体系用于对待测样品依次经由所述切割体系、sPCR扩增体系和HCR体系进行反应后所得产物进行显色检测；

其中，所述切割体系包括底物链I和酶链I以及底物链II和酶链II：

底物链I：5′-CTCTATCTATrA-GGAAGTACCGCCGC-3′

酶链I：5′-GCGGCGGTACCAGGTCAAAGGTGGGTGAGGGGACGCCAAGAGTCCCCGCGGTTAGATAGAG-3′

其中，rA表示核糖核酸；-表示钠离子切割位点；

底物链II：5′-GTCACGAGTCACTATrA-GGAAGATGGCGAAA-3′

酶链II：5′-TTTCGCCATCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGACTCGTGAC-3′

其中，rA表示核糖核酸；-表示镁离子切割位点；

所述sPCR扩增体系包括：正向隔断引物I、反向引物I、正向隔断引物II、反向引物II、模板：

正向隔断引物I：5′-AGACGAAGCACTGGTTGAAACTCC-隔断物-GGAGTTTCAACCAGTGCTTCGTCTTCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′

反向引物I：5′-GGAAGTACCGCCGCGGAGGGA-3′

正向隔断引物II：5′-AGTCTAGGATTCGGCGTCCCTTAA-隔断物-TTAAGGGACGCCGAATCCTAGACTTCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′

反向引物II：5′-GGAAGATGGCGAAATTCGGGGC-3′

模板：5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACCTCAGTATCAGTGCTATACGTCGATCAGTAGCCCCGAATTTCGCCATCTTCCTCCCTCCGCGGCGGTACTTCC-3′；

所述HCR体系包括4条探针：

探针1：5′-AGGGCGGGTGGGTGGAGTTTCAACCAGTGCTTCGTCTCCCCAGACGAAGCACTGGTTGATGGGT-3′

探针2：5′-TGGGTAGACGAAGCACTGGTTGAAACTCCTCAACCAGTGCTTCGTCTGGGGTGGGTAGGGCGGG-3′

探针3：5′-AGGGCGGGTGGGTTAAGGGACGCCGAATCCTAGACTCAAAGTAGTCTAGGATTCGGCGTCGGGT-3′

探针4：5′-GGGTAGTCTAGGATTCGGCGTCCCTTAAGACGCCGAATCCTAGACTACTTTGAGGGCGGGTGGG-3′。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述正向隔断引物中的隔断物为聚六乙二醇。

3.根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于，所述检测体系包括：酶活缓冲液和氯高铁血红素溶液。

4.权利要求1-3任一项所述的系统在检测镁、钠离子方面中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测为定性检测或定量检测。

6.基于权利要求1-3任一项所述系统的通用隔断超快扩增镁、钠切割型功能核酸可视化定性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、向所述切割体系中加入待测样品，进行切割反应；

S2、将S1所得切割产物加入所述sPCR扩增体系中进行超快聚合酶链式反应，得sPCR产物；

S3、将所述sPCR产物加入所述HCR体系中进行HCR反应，得HCR产物；

S4、利用所述检测体系对所述HCR产物进行检测。