[发明专利]检测双酚B的胶体金免疫层析检测卡及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种检测双酚B的胶体金免疫层析检测卡，属于添加剂检测技术领域。该检测卡上设有顺次搭接粘贴在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述胶体金结合垫上吸附有胶体金标记的抗双酚B单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上由样品垫端至吸水垫端依次设有检测线与质控线，所述检测线包被有双酚B‑载体蛋白偶联物，所述质控线包被有抗鼠二抗。该检测卡可快速特异地定性检测塑料奶瓶等塑料制品中含有的双酚B，具有特异性强的优点，并且该检测卡由于样本量需要少、检测速度快，检测时间为5‑10min，适用范围广，易于推广使用，可分批或单个样品及时检测。

技术领域

本发明涉及添加剂检测技术领域，特别是涉及一种检测双酚B的胶体金免疫层析检测卡及其制备方法和应用。

背景技术

双酚A，学名2，2-二(4-羟基苯基)丙烷，简称BPA，在许多塑料制品中都可能含有双酚A。但双酚A是雌激素类似物，能引起男孩女性化、女孩性早熟，对婴儿的生长发育也有影响。美国已禁止婴儿奶瓶等食品和饮料容器中使用化学物质双酚A。双酚B，2,2-二(4-羟基苯基)丁烷，简称BPB，在化学结构上与双酚A极其类似。动物实验显示，双酚B在生物学特性上也有与双酚A类似的雌激素效果。

《GB 14942-1994食品容器、包装材料用聚碳酸酯成型品卫生标准》中规定：奶瓶中酚类物质通过蒸馏水回流6小时的溶出游离量不大于0.05毫克/公斤。

目前，现有技术对于双酚B的检测有滴定法、比色法、示波极谱法、液相色谱荧光法和高效液相色谱-串联质谱法,这些方法普遍存在操作繁琐，对实验仪器设备要求高，需要专门技术人员操作等缺点。

因此亟需开发一种能够方便、快捷检测双酚B的适合现场快速检测双酚B的方法。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种检测双酚B的胶体金免疫层析检测卡，该检测卡具有便捷、快速、直观、成本低的特点，适合现场快速检测。

一种检测双酚B的胶体金免疫层析检测卡，所述检测卡上设有顺次搭接粘贴在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

所述胶体金结合垫上吸附有胶体金标记的抗双酚B单克隆抗体；

所述硝酸纤维素膜上由样品垫端至吸水垫端依次设有检测线与质控线，所述检测线包被有双酚B-载体蛋白偶联物，所述质控线包被有抗鼠二抗。

上述检测卡，采用层析式抗体免疫竞争的方法检测双酚B，具有便捷、快速、直观、成本低的特点，适合现场快速检测。

在其中一个实施例中，所述检测卡样品垫端和吸水垫端还分别设有样品端保护膜和手柄端保护膜，所述样品端保护膜覆盖样品垫、胶体金结合垫、以及硝酸纤维素膜与所述胶体金结合垫搭接端，所述手柄端保护膜覆盖吸水垫、以及硝酸纤维素膜与所述吸水垫搭接端。通过上述保护膜的实用，能够避免检测过程中受到的干扰和污染，确保检测结果的稳定可靠。

在其中一个实施例中，所述底板为PVC条；所述样品垫和胶体金结合垫由玻璃纤维棉制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成；所述保护膜为不透明的胶膜。

在其中一个实施例中，所述载体蛋白为牛血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白；所述抗鼠二抗为羊抗鼠IgG抗体、兔抗鼠IgG抗体或驴抗鼠IgG抗体。

在其中一个实施例中，所述双酚B-载体蛋白偶联物通过以下方法制备得到：将双酚B、3-溴丙胺、无水碳酸钾分散至丙酮中，加热回流反应，制得双酚B半抗原，将纯化后的双酚B半抗原、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)加入二甲基亚砜(DMSO)中溶解，搅拌反应，然后称取载体蛋白，溶解在溶液中NaHCO₃得到载体蛋白溶液，将含有双酚B半抗原的溶液加入上述载体蛋白溶液中反应，所得溶液透析，即得；

所述抗双酚B单克隆抗体通过以下方法制备得到：