[发明专利]一种干细胞活性因子冻干粉的制备方法

说明书

本发明涉及干细胞技术研究领域，提供了一种人间充质干细胞分泌的干细胞活性因子冻干粉的制备方法。所提供的人脂肪干细胞原料来源充足，提取安全方便，无任何不良反应，使用安全可靠。其制备过程具体包括以下步骤：(1)外源因子检测；(2)脂肪干细胞的原代分离、培养和传代；(3)间充质干细胞的鉴定；(4)上清液的收集；(5)冻干粉的制备；(6)对上述上清液和冻干粉的干细胞活性因子进行检测；(7)溶媒的配制和灌装。本发明制备的冻干粉相较于上清液易于保存，运输，且有效的保存了因子的活性，能够应用于美容行业，细胞因子含量高，冻干粉中水分含量低从而易于保存，烫伤后采用本发明中制得的冻干粉，加入生物多糖焦胶、胶原蛋白、叶酸、无菌超纯水制成的组合物去涂抹伤口时伤口的愈合率高。

技术领域

本发明属于生物技术药物领域，涉及干细胞技术研究领域，具体涉及一种人脂肪间充质干细胞分泌的干细胞活性因子的制备方法和用途。

背景技术

近年来，随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌因子已成为研究者们的热点。间充质干细胞可以分泌多种具有生物活性的细胞因子，这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。

干细胞在美容中的应用，最早是干细胞在整形外科中的运用，它是目前研究较多的一种干细胞美容技术。而在整形外科中应用得较多的干细胞种类主要亦是人脐带间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞等。

脂肪间充质干细胞(Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells,ADSCs)是来源于脂肪组织的干细胞，与其它成体干细胞一样具有自我更新和多向分化的能力，在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。脂肪间质干细胞在组织工程和细胞治疗方面具有广泛的应用前景，吸引了越来越多研究者的关注。

脂肪来源的间充质干细胞可以分泌200多种细胞活性因子，如表皮生长因子(EGF)，角质细胞生长因子(KGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，成纤维细胞生长因子(bFGF)，血管内皮生长因子(VFGF)等，这些细胞分泌的活性因子不仅种类繁多，且十分均衡，可以修复皮肤纤维组织的生长，促进皮下胶原蛋白的分泌与合成，还可以促进皮下血管新生成，分泌蛋白质，促进受损肌肤深层细胞组织愈合，淡化疤痕和痘印。

将细胞因子添加到美容化妆品，不仅具有一般化妆品的保湿美白功效，还能够修复受损皮肤，消除皮肤皱纹，收缩毛孔，改善面色等，越来越受到人们的关注。但是利用培养基进行常规培养时，干细胞的活性较低，分泌的因子含量很少，产量低，保存时间短，使用一些常规方法，例如机械摩擦、紫外线照射和饥饿培养等方案，并不能显著提高干细胞上清液中因子的含量。目前，也有一些对干细胞活性因子及冻干粉的制备方法的专利公开，例如中国专利申请201710015650.7中公开了一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途，该申请制备得到的浓缩液脂肪间充质干细胞因子含量得到了一定的提高，质量稳定，与其它材料在特定配比下组合物制备得到的产品对皮肤损伤具有一定的修复能力；中国专利申请201610680823.2中公开了一种人间充质干细胞培养上清液冻干粉的制备方法及制得的冻干粉，其最大程度上保存了人间充质干细胞培养上清液中的各种具有生物活性的细胞因子混合物，为其在美容等方面的应用奠定了基础；但采用以上专利中公开的方法制得的干细胞活性因子或其冻干粉应用到细胞修复的时候，不仅存在修复效果不佳，烫伤后创面愈合率低的问题，在制备过程中还存在细胞因子大量损失，冻干粉中水分含量高从而导致冻干粉不易保存的问题。

基于上述问题，本领域技术人员致力于公开一种干细胞活性因子冻干粉，以达到其可以促进皮下血管新生成，分泌蛋白质，促进受损肌肤深层细胞组织愈合，淡化疤痕和痘印的技术效果，同时以期制得一种干细胞活性因子冻干粉来达到烫伤后采用该冻干粉涂抹伤口时伤口的愈合率高、细胞因子含量高、冻干粉中水分含量低从而易于保存的效果。

本发明由此产生。

发明内容