[发明专利]一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法

权利要求书

1.一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、将鲑鳟鱼胚胎用固定液固定；

二、将鲑鳟鱼眼点期胚胎从固定液中取出，放入PBS缓冲液中浸泡洗去表面的固定剂，随后取出用刀片将卵切开去除卵皮，再用刀片切取胚胎头部及其它可辨识胚胎组织，置于新培养皿的细胞核染液中，然后切碎、摇匀制成胚胎细胞悬浊液；

三、用细胞核染液将切除头部及其它可辨识胚胎组织后的剩余胚胎细胞冲洗至步骤二胚胎细胞悬浊液中，再用30μm孔径滤网对胚胎细胞悬浊液进行过滤；取滤液用30μm孔径滤网再过滤一次，获得检测样本；

四、将染色的已知鲑鳟鱼二倍体样本用倍性分析仪检测，并调整荧光信号值至100处设定为对照样本；将检测样本染色后用倍性分析仪检测，记录荧光信号值，通过机器自带的分析系统，将检测样本的峰值图均值与对照样本峰值图比较，确定检测样本的倍性大小；

其中，步骤一中固定液按以下步骤制成，100ml PBS缓冲液中加入4g多聚甲醛，然后加入2～5滴NaOH并维持温度于60℃±2℃磁力搅拌直至多聚甲醛溶解，之后冷却至室温并调整pH值为7.4。

2.根据权利要求1所述的一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法，其特征在于固定液按以下步骤制成：100ml PBS缓冲液中加入4g多聚甲醛，然后加入2～5滴NaOH并维持温度于60℃±2℃磁力搅拌直至多聚甲醛溶解，之后冷却至室温并调整pH值为7.4，获得A液；然后将A液与等体积的无水乙醇混合，冷却至室温后加入体积4％的冰醋酸，即获得固定液。

3.根据权利要求1或2所述的一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法，其特征在于步骤二新培养皿中细胞核染液为300ml，其中200μl细胞核染液置于培养皿边缘处，其余100μl细胞核染液置于培养皿中央，胚胎头部或其它可辨识胚胎组织放置于中央100μl细胞核染液中，切碎后倾斜培养皿将细胞核染液合并制成胚胎细胞悬浊液。

4.根据权利要求3所述的一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法，其特征在于检测样本暂时存放须避光。

5.根据权利要求3所述的一种对鲑鳟鱼胚胎进行倍性鉴定的方法，其特征在于细胞核染液为CyStain DNA 1 Step。