[发明专利]一种蛹虫草粗多糖一步法脱色与除蛋白的纯化工艺

说明书

本发明公开了一种蛹虫草粗多糖一步法脱色与除蛋白的纯化工艺。所述纯化工艺包括如下过程：S1.制备蛹虫草粗多糖样品；S2.利用强极性大孔吸附树脂制备层析柱；S3.将蛹虫草粗多糖样品稀释为浓度0.01mg/mL～5mg/mL，然后过层析柱，控制样品流速为0.5～2.5BV/h，得到的滤液即为除去色素和蛋白的蛹虫草多糖滤液。本发明所述纯化工艺不仅可以快速地同时脱色和去除蛋白，其脱色率为85.94%，蛋白去除率为70.05%，多糖保留率为78.92%；而且处理后，蛹虫草多糖样品中多糖并未发生任何结构改变，其抗氧化作用显著高于传统的处理方法，同时对巨噬细胞均无细胞毒性，安全性高。此外，本发明所述纯化工艺过程简单，成本低廉，且采用的吸附剂安全、环保，适用于工业化批量纯化生产。

技术领域

本发明涉及蛹虫草有效成分分离提纯领域，更具体地，涉及一种蛹虫草粗多糖一步法脱色与除蛋白的纯化工艺。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militarisLink.)，又名北冬虫夏草、北虫草、蚕蛹虫草、东北虫草等，与冬虫夏草同属异种，由中华虫草菌寄生在鳞翅目蝙蝠蛾等昆虫上所形成子座（即草部分）与菌核（即昆虫的尸体部分）二部分的复合体。蛹虫草的主要功能成分有多糖、核苷类化合物、蛋白质等，其次它还含有虫草酸（甘露醇）、SOD酶、氨基酸、维生素及多种微量元素等，因此具有独特的药理和保健效果，是民间普遍的滋补保健食品和营养品。其中，蛹虫草多糖（CMP）作为蛹虫草中主要的生物活性成分之一，在调节免疫、抗炎症、抗氧化、抗肿瘤等方面有显著功效。为了进一步研究蛹虫草多糖（CMP）的构效关系，其分离纯化是必不可少的关键性步骤。

然而，制备蛹虫草粗多糖（CMP）的过程中会有大量色素和游离蛋白等杂质伴随多糖共同沉淀，此类杂质会严重影响进一步的结构解析与生物活性研究。为去除色素和游离蛋白等杂质，有大量文献报道的传统脱色方法有活性炭吸附法和过氧化氢氧化法，去除游离蛋白的方法有Sevage法和三氯乙酸法。

然而，这些传统方法有诸多劣势，例如有机试剂残留，工序繁琐耗时以及多糖损失率大等缺点。因此，建立一种快速高效的一步去除色素和游离蛋白的方法至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛹虫草粗多糖一步法脱色与除蛋白的纯化工艺。本发明所述纯化工艺不仅可以快速地同时脱色和除出蛋白，而且不影响蛹虫草多糖结构的变化，提高蛹虫草多糖提取液的抗氧化作用，且同时安全性高。

本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：

一种蛹虫草粗多糖一步法脱色与除蛋白的纯化工艺，包括如下过程：

S1. 制备蛹虫草粗多糖样品；

S2. 利用强极性大孔吸附树脂制备层析柱；

S3. 蛹虫草粗多糖纯化：将蛹虫草粗多糖样品稀释为浓度0.01mg/mL～5mg/mL，然后过层析柱，控制样品流速为0.5～2.5BV/h，收集得到的滤液即为除去色素和蛋白质的蛹虫草多糖滤液。

经过静态吸附时间的测试，样品在层析柱中的保留时间为100～140min时，脱色率和蛋白质去除率较好，最佳的保留时间是120min；但是在层析柱中，由于样品在层析柱中流动，样品在流动的过程中接触了新的强极性大孔吸附树脂，不同于静态吸附过程中，因此，采用层析柱纯化过程中，以样品的流速作为评价指标，当样品的流速为0.5～2.5BV/h时，样品在柱层析中的保留时间在20～120min时，即可保证脱色率和蛋白质去除率较好。

优选地，所述步骤S1的过程为：将蛹虫草粉碎并过60～100目筛；用无水乙醇浸泡12～48h，并保留滤渣；然后将滤渣加水，加热至70～90℃提取，再将提取液离心、浓缩、醇沉，并将沉淀离心、无水乙醇洗涤，得到蛹虫草粗多糖样品；