[发明专利]一种肺泡灌洗液样本处理液及处理检测方法

说明书

本发明公开了一种肺泡灌洗液样本处理液及处理检测方法，由无机盐和表面活性剂组成，该处理液能降低肺泡灌洗液中其他物质对真菌(1‑3)‑β‑D‑葡聚糖检测干扰。本发明是对肺泡灌洗液样本进行处理，用于体外检测侵袭性肺部真菌感染患者肺泡灌洗液中的真菌(1‑3)‑β‑D‑葡聚糖含量，与传统血清检测的方法比较，其检测灵敏度更高，并能够保持较高的特异性和准确性。

技术领域

本发明属于涉及真菌(1-3)-β-D-葡聚糖体外检测领域，尤其是涉及一种肺泡灌洗液样本处理液及处理检测方法。

背景技术

本发明用于辅助诊断临床上侵袭性深部真菌感染。随着皮质激素、免疫抑制剂、各种广谱类抗生素的大量使用和器官移植等临床技术的不断开发，对于一些免疫力低下的患者，侵袭性真菌感染的几率会普遍增高。(1-3)-β-D葡聚糖是医学上大部分重要真菌(包括念珠菌和曲霉菌)的细胞壁组成成分，人体吞噬细胞吞噬真菌后能持续释放该物质，使其在血液、肺泡灌洗液、脑脊液等人体液中的浓度升高，因此(1-3)-β-D葡聚糖的检测为一个关键性的指标。目前，G试验检测样本多为血清，而相较之下，侵袭性肺部真菌感染的患者，只有部分葡聚糖入血，含量远低于肺泡灌洗液中的含量，所以对于侵袭性肺部真菌感染患者，检测肺泡灌洗液，检出率更高。

G试验碱处理法因其检测(1-3)-β-D葡聚糖灵敏度高、特异性高、检测时间短而被医院采用。之前医院多采用加热稀释法对样本进行前处理，但该法很难使样本中(1-3)-β-D葡聚糖形态(单链形式、双股螺旋或三股螺旋形式)均一化，从而影响(1-3)-β-D葡聚糖检测特异性，国外学者研究表明，(1-3)-β-D葡聚糖经过热处理后可以转变为三股螺旋，而三股螺旋结构经碱处理可以水解为单链结构。故本次发明使用G试验碱处理法进行实验研究。

肺泡灌洗液的成分包括细胞、肺表面活性物质(pulmonary surfactant，PS)、炎症介质、生长因子、各种蛋质、酶类、脂类等。在肺泡灌洗液样本成分中存在一定的干扰因子会严重影响(1-3)-β-D葡聚糖的测定结果，降低了测定的特异性和准确性。所谓反应干扰因子是指与所定的生化反应无关的反应因子(假阳性因子)或者是在反应的任一阶段中对该反应具有干扰作用的因子(假阴性因子)。反应样本即肺泡灌洗液中含有此类因子。如Xa因子显示与溶胞产物中的凝结酶相类似的作用，因此成为假阳性因子。α1-抗胰蛋白酶对反应有很强的干扰作用，因此成为假阴性因子。

碱金属氢氧化物的作用是使反应干扰因子变性。强碱使蛋白质的氢键发生断裂，同时也会与游离的氨基等形成盐，变化过程中也有化学键的断裂和生成。变性后的干扰因子仍以溶解的状态存在于溶液中。而稀释加热法仅通过简单的物理变化，使得蛋白变性沉淀，变性后的蛋白沉淀有可能又会对反应带来浊度上的干扰。KCl对葡聚糖向血液成分的吸附具有抑制作用。碱金属卤化物的添加，防止葡聚糖被吸附到血液成分上，使得G因子级联反应顺利被葡聚糖激活，使得反应体系稳定化，具有提高再现性的作用。但是单纯使用传统血清检测中使用的处理液并不足以完全去除样本中的干扰因子，其检测结果准确度也有待提高，因此，解决肺泡灌洗液检测中的干扰问题尤为重要，它避免了患者后期不必要的临床检查和不合理的治疗。

发明内容

为解决检测干扰问题，本发明提供了一种肺泡灌洗液样本处理液及处理检测方法，利用G试验碱处理法，消除或降低肺泡样本中影响真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测的干扰因素，从而达到提高真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测灵敏度和特异性的目的。

本发明采用的技术方案是：一种肺泡灌洗液样本处理液，其特征在于：包括处理液A和处理液B，其中处理液A包括碱金属氢氧化物和表面活性剂，处理液B包括碱金属卤化物。

优选地，碱金属氢氧化物为氢LiOH、NaOH、KOH中的一种。

优选地，碱金属卤化物为KCl、MgCl₂、CaCl₂、SrCl₂中的一种。