[发明专利]一种季鏻盐离子液体共溶剂体系中植物甾醇生物转化制备雄烯二酮的方法

权利要求书

1.一种季鏻盐离子液体共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

(a) 以菌种编号ATCC 29472的分枝杆菌Mycobacterium sp. NRRL B-3683为菌种，进行种子液培养；

(b) 将步骤(a)所得种子液接种到发酵培养基中培养，制备静息细胞，冷冻保存备用；步骤(b)中发酵培养基中添加1~2 g•L^-1用tween 80水溶液预分散的植物甾醇作为诱导剂；步骤(b)中种子液接种量为8~12 vol.%，发酵培养温度为30℃，摇床转速为200 rpm，培养时间为48~60 h；

(c) 将步骤(b)所得静息细胞在含葡萄糖的Tris-HCl缓冲液中活化培养2~12 h，然后投入1~30 g•L^-1底物植物甾醇，使用0.1~1 vol.%的亲水性脂肪酸季鏻盐离子液体作为共溶剂，进行生物转化反应，制备雄烯二酮；步骤(c)中亲水性脂肪酸季鏻盐离子液体的阳离子为四丁基鏻，阴离子为[C₉H₁₉COO]^-、[C₁₁H₂₃COO]^-或[C₁₁H₂₃COO]^-。

2.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(a)中种子培养基中添加玻璃珠以分散细胞。

3.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(a)中种子液培养温度为28℃，摇床转速为180 rpm，培养时间为24~48 h。

4.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(b)中的发酵培养和步骤(c)中生物转化反应在底部加工有2个大小15 × 8× 2mm 挡板的500 mL锥形瓶中进行。

5.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(b)中发酵培养完成后，离心收集菌体，用pH 7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，即得所述静息细胞。

6.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(c)中静息细胞浓度为50 g•L^-1，葡萄糖浓度为2 g•L^-1，Tris-HCl缓冲液为pH7.5、0.1 M。

7.如权利要求1所述共溶剂体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮的方法，其特征在于步骤(c)中生物转化反应温度为30℃，摇床转速为200 rpm。