[发明专利]使用分泌修饰的α-1;6-葡糖苷酶的棒状杆菌生产精细化学品的方法

权利要求书

1.编码包含氨基酸序列a)、b)和c)的融合多肽的分离的多核苷酸：

a)是由SEQ ID NO：10的位置1至33或SEQ ID NO：12的位置1至33的氨基酸序列组成的N末端Tat信号肽

或

是由SEQ ID NO：10的位置1至33且位置13是Ala或SEQ ID NO：12的位置1至33且位置13是Ala的氨基酸序列组成的N末端Tat信号肽：；

b)是具有α-1,6-葡糖苷酶活性的C-末端多肽，其由选自以下的氨基酸序列组成：

b1)与SEQ ID NO：10的位置37至639的序列具有至少(≥)95％相同性的氨基酸序列，和

b2)与SEQ ID NO：12的位置37至643的序列具有至少(≥)95％相同性的氨基酸序列，和

c)在a)和b)之间为0至最多10个氨基酸残基。

2.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述氨基酸序列

b1)选自SEQ ID NO：10的位置37至639以及由SEQ ID NO：6所示的SEQ ID NO：10的位置37至639加上在位置37前面的N末端额外的Met，和

b2)选自SEQ ID NO：12的位置39至643、SEQ ID NO：12的位置38至643和SEQ ID NO：12的位置37至643。

3.权利要求1或2中任一项的分离的多核苷酸，其中c)的氨基酸残基的所述数目为1至3。

4.权利要求3的分离的多核苷酸，其中c)的氨基酸残基的所述数目为3。

5.权利要求4的分离的多核苷酸，其中a)和b)之间的所述氨基酸残基由氨基酸序列MetThr Ser组成。

6.权利要求4的分离的多核苷酸，其中c)的所述氨基酸残基由氨基酸序列Ile Leu Val组成。

7.权利要求1至6中任一项的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸与启动子功能性连接。

8.权利要求7的分离的多核苷酸，其中所述启动子是根据SEQ ID NO：14的位置1-75的核苷酸序列的PtacI启动子或根据SEQ ID NO：15的核苷酸序列的PdapBN1启动子。

9.权利要求8的分离的多核苷酸，其中所述启动子是根据SEQ ID NO：15的PdapBN1启动子。

10.一种选自棒状杆菌属的细菌，其包含权利要求1至9中任一项的分离的多核苷酸，其中所述细菌具有分泌由所述分离的多核苷酸编码的具有α-1,6-葡糖苷酶活性的多肽的能力。

11.权利要求10的细菌，其中所述分离的多核苷酸包含在在所述细菌中自主复制的质粒载体中或所述细菌染色体中。

12.权利要求10或11中任一项的细菌，其中所述细菌为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。

13.权利要求10-12中任一项的细菌，其中所述细菌具有分泌和产生选自L-氨基酸、维生素、核苷和核苷酸的精细化学品的能力。

14.权利要求13的细菌，其中所述精细化学品是L-氨基酸。

15.权利要求14的细菌，其中所述L-氨基酸选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸和L-异亮氨酸。

16.一种用于生产选自L-氨基酸、维生素、核苷和核苷酸的精细化学品的方法，其包括在合适的培养基中培养根据权利要求10至15中任一项的生产精细化学品的细菌，其中用于培养所述细菌的碳源使用包含由至少两个α-1-6-糖苷连接的葡萄糖单体组成的α-D-葡萄糖寡聚体。