[发明专利]一种从三七叶总皂苷中分离纯化三七皂苷Fc的方法

说明书

本发明公开一种从三七叶总皂苷中分离纯化三七皂苷Fc的方法，以三七叶总皂苷为原料，通过中压柱层析制备得到三七皂苷Fc粗品，再经反相高效液相色谱法和正相高效液相色谱法纯化即得。可得到含量98%以上纯品，达到对照品级别。

技术领域

本发明涉及中药有效成分的提取分离纯化技术领域，具体是对三七叶总皂苷中三七皂苷Fc的分离纯化方法。

背景技术

三七，又名田七、金不换，为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H.Chen的干燥根和根茎。主要分布于云南、广西、江西、四川等地。传统功效用于止血活血、散瘀消肿、止痛等。现代研究发现对心脑血管系统、神经系统、免疫系统等均具有多方面的生理作用。由于三七的生物活性多样，使用量增加，三七根部的供应量已很难满足日益增长的市场需求。基于三七资源的综合利用和优化利用，迫切需要开发新的资源和利用植物其他部位资源。与根系所需的长周期相比，叶的年回收率可能是另一来源。三七不同部位富含不同类型的皂苷，作为三七叶和根的显著区别是叶中含有丰富的20(S)-原人参二醇型皂苷。目前据文献报道，三七皂苷Fc具有明显的抑制血小板凝聚、改善心肌缺血、心肌保护等作用，可用于防治心肌缺血、心肌梗死等各种血栓性疾病。郑丽阳等还证明三七皂苷Fc可降低2型糖尿病db/db小鼠尿蛋白，延缓肾脏病变进展，具有肾脏保护作用。通过上述结果我们可以看出，当前对三七叶中皂苷有效成分的研究很有必要，它不仅能优化资源利用，还有很好的药用价值。其中三七皂苷Fc为20(S)-原人参二醇组皂苷，为三七叶总皂苷中主要有效活性成分。因此提取纯化三七叶总皂苷中的活性成分三七皂苷Fc具有重大意义。截止目前为止，未见有高含量三七皂苷Fc的分离纯化专利报道。

发明内容

本发明提供一种从三七叶总皂苷中分离纯化三七皂苷Fc的方法，以三七叶总皂苷为原料，经过柱层析分离，富集含有三七皂苷Fc的部分，将富集的部分进行纯化，最终得到高纯度三七皂苷Fc，为三七皂苷Fc的综合开发利用和三七皂苷Fc的大量制备提供重要依据。

本发明采用的技术方案如下：

一种从三七叶总皂苷中分离纯化三七皂苷Fc的方法，具体步骤为：

（1）将三七叶总皂苷溶于甲醇水溶液，采用LK-20树脂进行中压柱层析，用甲醇-水系统进行等度洗脱，收集洗脱液，浓缩，得三七皂苷Fc粗品；

（2）将三七皂苷Fc粗品用甲醇溶解过滤，用反相高效液相色谱法进行制备，收集含有三七皂苷Fc的洗脱液，浓缩后用甲醇溶解，放至析出白色晶体；

（3）将白色晶体用色谱甲醇溶解，用正向高效液相色谱法进行纯化，收集含有三七皂苷Fc的洗脱液，即得纯化后的三七皂苷Fc。

步骤（1）中将三七叶总皂苷溶于体积比为20-60%的甲醇水溶液；用体积比为71-74%的甲醇-水系统进行等度洗脱，中压柱层析流速为15-30mL/min。

步骤（2）中反相高效液相色谱法采用C18柱，体积比为28-31%的乙腈-水系统进行等度洗脱，流速为15-20mL/min。

步骤（3）中正向高效液相色谱法采用HILIC柱，体积比为30-33%的乙腈-水系统进行等度洗脱，流速为15-20mL/min。

本发明的优点在于：

1、首次采用LK-20树脂分离制备三七皂苷Fc，可快速高效得到三七皂苷Fc粗品，简化操作过程，且树脂可反复使用，经济环保；

2、分离过程中采用中压制备，操作简单，节约时间；中压树脂柱分离过程中，未使用有毒、昂贵有机溶剂，节约成本、保护环境；

3、HILIC色谱柱为结构独特的中性酰胺键合相，亲水性突出，而且避免了纯硅胶表面硅醇基的酸性和不均一性。使用高比例乙腈-水做流动相可以保留在传统的反相色谱柱上很难保留的强极性化合物；