[发明专利]一种用于嗜铬细胞瘤/副神经节瘤早期诊断和术前评估的生物标志物及其应用在审
| 申请号： | 201810610358.4 | 申请日： | 2018-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN108588224A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 刘晶;王亮;马静云 | 申请（专利权）人： | 大连医科大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 刘慧娟;李馨 |
| 地址： | 116011 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 副神经节瘤 嗜铬细胞瘤 术前评估 双链DNA 生物标志物 早期诊断 肿瘤细胞 血清 双链DNA片段 分子标志物 临床诊断 突变频率 位点信息 易感基因 转移表型 标志物 基因组 体细胞 外周血 无创性 中双链 染色体 可用 突变 应用 | ||
1.一种用于嗜铬细胞瘤/副神经节瘤早期诊断和术前评估的生物标志物，其特征在于：所述的生物标志物为嗜铬细胞瘤/副神经节瘤患者外周血血清外泌体中含有的基因组双链DNA片段。
2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于：所述的双链DNA片段的提取过程为：先用DNase I处理外泌体样品以消化外部DNA；用RNase A消化外部RNA；用EDTA进行螯合，再按照外泌体样品与蛋白酶K 1:20～100的体积比添加蛋白酶K，50-60℃消化5-20分钟。
3.根据权利要求2所述的生物标志物，其特征在于：所述蛋白酶K按照外泌体样品与蛋白酶K为1:20～40的体积比添加。
4.根据权利要求2所述的生物标志物，其特征在于：所述的蛋白酶K消化温度为56℃；消化时间为10分钟。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的生物标志物，其特征在于：所述外泌体提取的方法为：取嗜铬细胞瘤/副神经节瘤突变患者外周血样品，于4℃、3000-5000rpm离心5-20分钟收集血清；将收集到的血清再次进行3000-5000rpm离心5-20分钟后，取上清液进行100000g-120000g超速离心、洗涤、重悬即得。
6.如权利要求1所述的生物标志物在嗜铬细胞瘤/副神经节瘤早期诊断和术前评估中的应用。
7.如权利要求1所述的生物标志物在检测嗜铬细胞瘤/副神经节瘤易感基因中的RET、VHL、HIF2A以及SDHB的体细胞变异情况中的应用。
8.一种嗜铬细胞瘤/副神经节瘤易感基因检测试剂盒，其特征在于：包括用于检测权利要求1所述的生物标志物的检测试剂。
9.根据权利要求8所述的嗜铬细胞瘤/副神经节瘤易感基因检测试剂盒，其特征在于：所述的生物标志物检测试剂包括DNase I、RNase A、EDTA、蛋白酶K。
10.根据权利要求8所述的嗜铬细胞瘤/副神经节瘤易感基因检测试剂盒，其特征在于：所述的生物标志物检测试剂的使用方法，包括如下步骤：DNase I于室温下处理样品10-25分钟，以消化外部DNA；用RNase A消化外部RNA；用EDTA进行螯合，1:20～100加入蛋白酶K在50-60℃消化DNase I、RNase A及其它外部蛋白5-20分钟。
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