[发明专利]一种胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380及其应用

说明书

本发明公开了一种胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380及其应用。本发明胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该免疫保护性抗原蛋白由582个氨基酸组成，其成熟多肽部分为25‑582位氨基酸。编码该免疫保护性抗原蛋白的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.2所示。本发明的免疫保护性抗原蛋白具有很好的免疫原性和免疫保护作用强，其具有制备用于检测胸膜肺炎放线杆菌抗体的试剂盒的应用、制备猪胸膜肺炎亚单位疫苗的应用、制备用于预防由胸膜肺炎放线杆菌引起的疾病的药物的应用。本发明为制备猪胸膜肺炎亚单位疫苗提供了新的材料，对猪胸膜肺炎的防制具有重要意义。

技术领域

本发明涉及动物传染病亚单位疫苗制备技术领域，具体涉及一种胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380及其应用。

背景技术

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)是一种革兰氏阴性菌小杆菌，是引起猪胸膜肺炎的病原菌。该病是一种高度接触传染的呼吸道疾病，以急性出血性、纤维素性、坏死性支气管肺炎和纤维素性胸膜炎为主要特征，自1957年Pattison等首次报道以来，该病已遍布全球多个国家和地区，严重阻碍养猪业的健康发展。

疫苗免疫是预防和控制猪胸膜肺炎的有效手段。猪胸膜肺炎亚单位疫苗通常是以经鉴定的胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白为基础，通过适当处理制成的疫苗制剂。亚单位疫苗使用安全，能激发动物产生高水平抗目的抗原蛋白的抗体，为动物提供一定的保护。但是目前，可被人们用来生产猪胸膜肺炎亚单位疫苗的免疫保护性抗原蛋白数量较少，很大程度上限制了猪胸膜肺炎亚单位疫苗的改进和发展。因此，发掘新的免疫保护性抗原蛋白，对开发高效猪胸膜肺炎亚单位疫苗和该病的控制具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380。本发明的目的还在于提供所述免疫保护性抗原蛋白APJL_1380的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，该免疫保护性抗原蛋白由582个氨基酸组成，其成熟多肽部分为25-582位氨基酸。编码该免疫保护性抗原蛋白的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.2所示。

一种重组表达载体，包含所述免疫保护性抗原蛋白成熟多肽的编码序列。

一种重组工程菌，包含所述重组表达载体的大肠杆菌。

所述胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)构建包含所述免疫保护性抗原蛋白或其成熟多肽编码序列的重组表达载体；所述的重组表达载体的骨架载体优选为pGEX-KG。

(2)将所述重组表达载体转化到宿主细胞中；所述的宿主细胞优选为大肠杆菌；

(3)培养所述经转化的宿主细胞并诱导其表达所述免疫保护性抗原；所述的培养、诱导的条件优选为：将经转化的宿主细胞在37℃培养至OD₆₀₀为0.6-0.7时，加入IPTG至终浓度1.0mM，转至37℃继续培养3-4小时。

(4)从所述经过诱导的宿主细胞分离和纯化所述胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原。

所述的胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原能够与兔抗胸膜肺炎放线杆菌多克隆抗体进行结合反应，表明其具有很好的免疫反应性，可用于样品中胸膜肺炎放线杆菌抗体水平的测定。因此，上述胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原具有制备用于检测胸膜肺炎放线杆菌抗体的试剂盒的应用，所述试剂盒基于的方法包括ELISA法、蛋白印迹法、胶体金免疫法、斑点杂交法等。