[发明专利]一种延长葡萄组培苗保存时间的方法

说明书

本发明涉及一种利用组织培养技术进行葡萄种质资源离体保存的方法，特别是一种延长葡萄组培苗保存时间的方法。本方法将葡萄组培苗接种于培养基中，在培养基表面加入无菌水覆盖葡萄组培苗，常规或者低温培养条件培养。本方法通过在培养基表面覆盖无菌水，抑制培养基水分蒸发，有效延长了葡萄组培苗的保存时间，确保葡萄组培苗中间不继代保存30个月，相比于矿物油，成本较低，大大提高了试管苗的成活率，并且使用、清洗更方便，值得大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及一种利用组织培养技术进行葡萄种质资源离体保存的方法，特别是一种延长葡萄组培苗保存时间的方法。

背景技术

在组织培养保存种质资源的过程中，由于培养基水分蒸发，营养消耗，每隔一段时间，要将培养物及时转移接种到新培养基中，进行继代培养。葡萄组培苗一般2个月继代一次，频繁继代培养要消耗大量的人力、物力和时间，随继代次数的增加，还会导致体细胞无性系变异几率增加，有可能使保存的原始种质丢失。通过改变培养物生长条件，调控葡萄组培苗的生长节奏，延缓其生长，可以有效减少继代次数，改良种质资源离体保存方法。有的果树树种可通过降低培养温度，延缓组培苗生长，延长继代间隔时间，但葡萄抗寒性较差，大部分品种不能长期适应10℃以下冷藏箱的条件。通过在培养基中添加PP₃₃₃等生长延缓剂或加入甘露醇提高培养基渗透压可在一定程度上抑制葡萄组培苗生长，但由于室温下培养，封口材料透气，培养基水分蒸发殆尽，葡萄组培苗只能延长约3个月的保存时间。

CN104969857A公开了一种利用矿物油覆盖延长葡萄组培苗保存时间的方法，利用矿物油覆盖葡萄组培苗，有效抑制了培养基水分蒸发，通过降低培养环境的氧气含量，延缓了葡萄组培苗生长，延长了保存时间。但是申请人经过一系列试验发现，利用矿物油覆盖延长葡萄组培苗保存时间的方法存在下列问题：

1、以每瓶加入80ml矿物油算，每保存一瓶葡萄试管苗，需要投入的矿物油成本约25.6元，成本较高不便于大范围推广应用；

2、若是将矿物油重复使用，则保存试管苗成活率大大降低，效果很差；

3、加矿物油保存种质时导致培养架面有油渍，不便卫生清洁，同时用过的三角瓶因有油，也不好清洗；

4、废弃的矿物油不易处理，随意丢弃存在生态污染风险。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种延长葡萄组培苗保存时间的方法，通过在培养基表面覆盖无菌水，抑制培养基水分蒸发，还可结合低温条件及添加生长延缓剂处理，有效延长了葡萄组培苗的保存时间，确保葡萄组培苗中间不继代保存16～30个月，为有效利用组织培养技术进行葡萄种质资源的离体保存提供技术支撑；另外，本发明相比于矿物油，成本较低，试管苗的成活率大大提高，并且使用、清洗更方便，更加卫生、清洁、环保，值得大规模推广使用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种延长葡萄组培苗保存时间的方法，将葡萄组培苗接种于培养基中，在培养基表面加入无菌水覆盖葡萄组培苗，常规或低温培养条件培养，具体包括以下步骤：

S1，制备培养基；

S2，将葡萄组培苗接入培养基中：将葡萄组培苗嫩梢切分成1.5～2.5cm、不带叶片的双芽茎段，接入培养基中；

S3，培养基表面加入无菌水覆盖葡萄组培苗：接种后即在培养基表面加入无菌水，无菌水高出培养基表面1～2cm，用双层封口膜封口；

S4，常规培养或者低温培养：常规培养条件为温度(25±3)℃，光照强度2000lx左右，光照时间10～14h/d；低温培养条件为葡萄组培苗接种后先常规培养4～6周，后置于11～15℃培养箱培养保存；

S5，恢复生长。