[发明专利]一种结直肠癌实体瘤组织样本解离液

权利要求书

1.一种结直肠癌实体瘤组织样本解离液，其特征在于：所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶II、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶II在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为50-150U/mL；余量均为PBS。

2.根据权利要求1所述的样本解离液，其特征在于：所述样本解离液为由所述胶原酶I、所述胶原酶II、所述胶原酶IV和所述PBS混合而成的溶液。

3.根据权利要求1所述的样本解离液，其特征在于：所述样本解离液中的各组分单独存在。

4.根据权利要求3所述的样本解离液，其特征在于：所述胶原酶I、所述胶原酶II和所述胶原酶IV以母液形式存在；

具体的，所述母液为10或20倍母液；

10×胶原酶I溶液由所述胶原酶I和PBS组成；其中，所述胶原酶I的终浓度为2000U/mL；余量均为PBS；

10×胶原酶II储液由所述胶原酶II和PBS组成；其中所述胶原酶II的终浓度为2000U/mL；余量均为PBS；

20×胶原酶IV储液由所述胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶IV的终浓度为2000U/mL；余量均为PBS。

5.一种用于从结直肠癌实体瘤组织中解离出结直肠癌实体瘤原代细胞的成套试剂，含有权利要求1-4中任一所述的样本解离液和权利要求9中所述的消化终止液。

6.权利要求1-4中任一所述的样本解离液或权利要求5所述的成套试剂在从结直肠癌实体瘤组织中解离出结直肠癌实体瘤原代细胞中的应用。

7.一种从结直肠癌实体瘤组织中解离出结直肠癌实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：按0.1-0.3mL权利要求1-4中任一所述的样本解离液每mg组织的用量，将剪碎后的结直肠癌实体瘤组织用事先37℃预热的所述样本解离液进行处理，在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至3小时。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在用所述样本解离液对所述结直肠癌实体瘤组织进行解离处理后还包括如下步骤：用消化终止液终止解离反应，收集细胞悬液；过滤所述细胞悬液，去除组织残片和粘连细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述消化终止液由胎牛血清、抗菌抗真菌剂三抗和DMEM培养基组成；其中，所述胎牛血清在所述消化终止液中的终浓度为8-12％(体积百分含量)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B在所述消化终止液中的终浓度为250-500ng/mL；余量均为DMEM培养基。

10.根据权利要求1-9中任一所述的样本解离液或成套试剂或应用或方法，其特征在于：所述结直肠癌为原发性结直肠癌，病理分期为II期、III期或IV期，各种病理分型的结直肠癌或结直肠癌转移病灶。