[发明专利]一种NK细胞免疫检查点抑制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：其结构式如下：

其制备方法包括如下步骤：

(1)氮气保护下，将第一化合物与3-氯-1-丙醇溶于含有分子筛的无水DCM和乙腈等量混合的混合溶剂中，室温下搅拌30min后加入N-碘代丁二酰亚胺，室温下继续搅拌25～35min，反应用-40～-35℃的冷却仪冷却，然后缓慢加入TfOH，2.5～3.5h后用DCM稀释反应混合液，用18～22％Na₂S₂O₃和水清洗，然后对所得有机相进行干燥浓缩，过柱分离后旋蒸得到第二化合物；上述第一化合物的结构式为：

(2)将第二化合物和NaN₃溶于DMF中，在氮气保护下于75～82℃回流10～12h，真空浓缩后用DCM稀释，然后用水清洗，硫酸钠干燥，过滤浓缩得到第三化合物；

(3)将第三化合物和4-乙炔联苯溶于19mL叔丁醇中，加入2.8mL DMF，再与溶有抗坏血酸钠和硫酸铜的水混合，然后搅拌15～20h，除去叔丁醇，加入DCM，用乙酸水溶液清洗，水相用DCM清洗，收集DCM相，用硫酸镁干燥，过滤浓缩后通过硅胶柱纯化，旋蒸得到第四化合物；

(4)将第四化合物溶于无水甲醇中，然后与新制备的甲醇钠混合至pH为9.8～10.2，用TLC检测反应进程，2.5～3.2h后终止反应，将物料通过陶氏化学离子交换树脂除去其中的金属离子，过滤浓缩，得到第五化合物；

(5)用DMF将第五化合物进行浓缩除去其中的水份，加入干燥的LiN₃，将溶液置于冰水混合物上进行冷却，加入CBr₄和三苯基膦，室温下反应15～18h后加入甲醇搅拌25～35min终止反应，再加入二氯甲烷，然后用100mL水对物料进行清洗，接着对水相采用DCM进行萃取，与原先的DCM溶液混合后进行浓缩，进行硅胶柱分离，旋蒸后得到第六化合物；

(6)将第六化合物、Pd/C与无水甲醇混合均匀，加入乙酰氯调节至pH＝1～2；将混合物置于氢气气氛下搅拌反应，通过TLC监测至反应完全时，将反应物过滤以除去催化剂；蒸发除去溶剂，将残余物、EDC·HCl、HOBT、三乙胺、第八化合物与DMF混合均匀，于黑暗中搅拌45～50h；蒸发除去溶剂，残余物通过柱层析纯化，得到浅黄色固体；称取该浅黄色固体，将其溶于H₂O中，与溶于DMF的5-叠氮荧光素混合，接着加入预先配制好的CuI/TTTA的DMF溶液，室温下搅拌1h，加入抗坏血酸钠，继续反应1.5～2.5h，并用TLC监测反应进程，之后离心过P-2柱，将产物冻干后重溶于水中，除去不溶杂质，然后再将上清液进行过C18柱，得到所述NK细胞免疫检查点抑制剂；上述第八化合物的结构式为：

2.如权利要求1所述的一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：所述步骤(1)中，所述第一化合物、3-氯-1-丙醇、混合溶剂、N-碘代丁二酰亚胺和TfOH的比例为6～6.5mmol∶10～10.5mmol∶55～65mL∶6～6.5mmol∶0.8～0.9mmol。

3.如权利要求1所述的一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：所述步骤(2)中，所述第二化合物、NaN₃和DMF的比例为1.1～1.2mmol∶9.1～9.2mmol∶12～16mL。

4.如权利要求1所述的一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：所述步骤(3)中，所述第三化合物、4-乙炔联苯、DMF、抗坏血酸钠和硫酸铜的比例为2～2.5mmol∶2～2.5mmol∶2.5～3mL∶1～1.2mmol∶1～1.2mmol，叔丁醇和水的体积比为18～20∶18～20。

5.如权利要求1所述的一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：所述步骤(5)中，所述第五化合物、LiN₃、CBr₄和三苯基膦的质量比为500∶200～220∶620～630∶290～300。

6.如权利要求1所述的一种NK细胞免疫检查点抑制剂，其特征在于：所述步骤(6)中，所述第六化合物、Pd/C、无水乙醇、EDC·HCl、HOBT、三乙胺和第八化合物的比例为5.2～5.3g∶280～320mg∶80～110mL∶10～10.5mmol∶10～10.5mmol∶25～26mmol∶8.5～9mmol；所述浅黄色固体、5-叠氮荧光素、CuI和TTTA的质量比为4～4.5∶4～4.5∶0.4～0.6∶2～2.3。