[发明专利]一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法及其应用，该方法包括(1)配制金纳米结构溶液；(2)配制高铁血红素溶液；(3)制备标准样品；(4)建立以枝状金纳米结构为拉曼基底，检测高铁血红素浓度的标准曲线；(5)检测红细胞中高铁血红素的浓度。本发明基于枝状金纳米结构对高铁血红素的表面增强拉曼作用，将枝状金纳米结构应用于高铁血红素的测定，通过表面增强拉曼光谱分析方法实现了红细胞中高铁血红素高效、快速、灵敏、选择性的检测，对临床检查和疾病诊断等具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种高铁血红素的检测方法，具体涉及一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法。

背景技术

高铁血红素(Hematin)是由卟啉与Fe³⁺的络合物，是血红素(Heme，重要的天然金属卟啉配合物，生物体中血红蛋白和肌红蛋白等的活性中心)的氧化形式。当血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白时，Fe²⁺会以Fe³⁺形式存在，此时血红素就会以高铁血红素的形式从血红蛋白上释放到红细胞液中。

高铁血红素在体外是有效的溶血剂，在体内则会破坏红细胞膜，导致细胞膜破裂。在生理pH条件下，高铁血红素极易自身聚合，并强烈吸附在各种物质表面，如红细胞表面，这会使镰刀型红细胞更强的吸附于白细胞和内皮细胞上。由于高铁血红素对红细胞的危害，急需发展一种用于快速，准确地检测人体红细胞中高铁血红素的方法。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，该方法将枝状金纳米结构应用于高铁血红素的检测，建立一种基于表面增强拉曼作用的检测高铁血红素的新方法，所述方法能够快速、有效的检测人体红细胞中的高铁血红素，并且具有灵敏度高、操作简单、成本低廉等优点。

本发明还提供上述基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法在检测人类红细胞中高铁血红素的浓度中的应用。

技术方案：为了实现是上述目的，如本发明所述一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制金纳米结构溶液：将金纳米结构分散在磷酸盐缓冲溶液中，得到金纳米结构分散液A；

(2)配制高铁血红素溶液：将高铁血红素溶解在不同体积的磷酸盐缓冲溶液中，得到不同浓度的高铁血红素溶液B；

(3)制备标准样品：将金纳米结构分散液和高铁血红素母液B混合搅拌，然后离心分离，移去上清液，将下层沉淀物分散到PBS中，取分散液晾干，得到含有不同浓度高铁血红素的标准样品；

(4)建立以枝状金纳米结构为拉曼基底，检测高铁血红素浓度的标准曲线：通过拉曼光谱仪检测步骤(3)所制备的标准样品的拉曼光谱，并记录其拉曼光谱特征峰信号I；最后将所得到的I与步骤(3)中的标准样品的高铁血红素浓度的自然数对数值绘制成I-ln c标准曲线，采用线性回归法得到I-ln c线性回归方程，建立基于表面增强拉曼作用的高铁血红素的检测方法；

(5)检测红细胞中高铁血红素的浓度：将红细胞样品与步骤(1)中配制的金纳米结构溶液混合搅拌，然后离心分离，移去上清液，将下层沉淀物分散到PBS中，取分散液晾干，按照与步骤(4)相同的方法检测其拉曼光谱，根据拉曼光谱特征峰的强度I，由步骤(4)中得到的标准曲线，计算出待测样品中高铁血红素的含量。