[发明专利]一种柚木子叶不定芽诱导的快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种柚木子叶诱导不定芽产生的快速繁殖方法，步骤如下：选取生长良好的完全成熟或八成熟柚木种子消毒后，将其接种到萌发培养基上，待种子萌发后将其转移到不定芽诱导培养基上培养，30d后将获得的不定芽转接到增殖培养基和壮苗培养基中培养，30d后获得生长良好的柚木单株苗。本发明提供了一种高效快速繁殖种苗的方法，具有再生率高、出芽多的特点，可有效解决优良种苗种质退化问题，整个流程都操作简单。

技术领域

本发明涉及一种柚木子叶不定芽诱导的快速繁殖方法，属于植物生物技术领域。

背景技术

柚木（Tectona grandis L.f.）别名胭脂树，为马鞭草科柚木属落叶半落叶性高大乔木，天然分布于缅甸、泰国、印度和老挝等国。柚木生长迅速、材质优良、用途广泛，为世界名贵的用材树种，也成为我国热带地区的主要造林和经济树种。

柚木木材结构致密、材质坚韧、纹理美观、耐腐，因此具有很高的利用价值，使其已成为目前国内外市场上最短缺的珍贵木材之一。柚木的传统繁殖方式为种子繁殖，受台风影响部分地区种子产量较低，并且种子萌发率低，难以满足生产的需求。自20世纪80年代起国内开始开展的柚木组织培养研究，现有的柚木组培快速繁殖方法一般采用枝芽为外植体消毒处理，接种到培养基上，待长出不定芽后将其继代增殖培养，继代方式一般采取截段式，这在一定程度上提高了柚木的繁殖速率。本发明利用子叶诱导不定芽发生，可以选择八成熟的柚木种子作为材料，提高种子利用率，躲避台风的侵害，此外，每片子叶能产生大量不定芽，大大提高了繁育效率。

柚木在我国市场需求量大，且国内无天然林资源，国外引进的种质资源在推广过程中面临着许多的问题，如低温冻害、病虫害以及台风影响等，因此在常规育种的基础上，开发柚木的转基因技术，研制抗寒、抗虫、抗病、速生的转基因新品种，对于我国柚木的推广栽培也具有重要意义。植物再生体系是植物基因转化的基础。研究团队对柚木间接再生方式做了一些研究，结果发现利用叶片和茎段诱导能顺利获得愈伤组织，但愈伤组织很难分化出不定芽，柚木尚未建立完善的再生体系。本研究工作利用柚木子叶诱导不定芽的产生，为遗传转化奠定基础。

发明内容

本发明提供一种柚木子叶不定芽诱导的快速繁殖方法，以解决柚木再生率低下的问题，同时为柚木遗传转化奠定基础。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种柚木子叶不定芽诱导的快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）利用枝剪工具去除柚木坚硬的果皮，剥离获得柚木种子，注意保持种皮的完整，不用浸泡种子，直接准备进行消毒处理。

选取当年生柚木种子，用枝剪将柚木的果实一分为二，露出种子，再仔细将种子剥离，准备消毒；所述消毒为：于超净工作台上，用体积分数为70％酒精浸泡30～60s，无菌水冲洗2～3次，再用质量分数为0.1％升汞溶液消毒5min～8min，然后用无菌水冲洗3～5次。

（2）柚木种子消毒处理后接种到MS基本培养基上培养，待子叶伸展开后将其转移到不定芽诱导培养基上培养。所述基本培养基为：MS+4.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；所述各步骤中培养条件均为培养室温度白天25±2℃，夜晚18±2℃，光照强度1000～1500lx，光照时间16h/d。

（3）去掉种皮，将伸展开的子叶转接到不定芽诱导培养基上，诱导丛生芽发生，所述不定芽诱导培养基为:MS+0.1～0.2mg/L TDZ+0.5～1.0mg/L CH(水解酪蛋白)+4.5 g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0。