[发明专利]一种拟靶向代谢组学分析的离子对挑选方法

权利要求书

1.一种拟靶向代谢组学分析的最优离子对挑选方法，其特征在于：液相色谱-质谱采用可变质量窗口的信息非依赖采集模式对待分析质量控制样本在10V到60V碰撞能范围内进行两个及以上不同能量下的代谢物信息采集；利用软件从原始数据获取代谢物的一级质谱保留时间，母离子和母离子强度以及各碰撞能量下母离子对应的二级质谱子离子，子离子强度信息；根据子离子强度筛选最优碰撞能量，得到代谢物的候选最优离子对，组成候选离子对列表；对候选离子对进行验证，去除假阳性后整合得到用于拟靶向代谢组学分析的最优离子对；

最优离子对的获取步骤如下，

1）若碰撞能个数是n，则用户根据需求选择在n/2到n之间的任意一个整数设为母离子出现频数阈值，用户根据需求设定200及以上的整数作为子离子强度阈值，根据代谢物质谱碎裂最小碎片为-CH₂-设定二级质谱信息中的母离子与子离子的质量差阈值来去除噪音干扰；

2）将一级质谱中的母离子与每个碰撞能下的二级质谱中母离子的保留时间和m/z分别作差，并分别设定它们的阈值，其中保留时间阈值根据实验中色谱保留时间稳定性进行设定，m/z阈值根据实验所使用质谱仪的分辨率进行设定;若保留时间和m/z的差值同时满足小于设定的阈值，则一级质谱产生的母离子和进行二级质谱碎裂的母离子产生的子离子相互对应，定义母离子和与之匹配的子离子构成离子对；

3）根据一级质谱中母离子信息进行离子融合得到唯一代谢物的离子对，其中母离子融合步骤包含同位素离子峰去除、中性丢失离子峰去除、不同加和形式离子峰去除；

4）从离子融合后唯一代谢物的离子对中依次选出每个代谢物中子离子强度最大的离子对作为最优离子对，由此可得到每个碰撞能下最优离子对列表。

2.根据权利要求1所述的拟靶向代谢组学分析的最优离子对挑选方法，其特征在于：待分析质量控制样本和液相色谱-质谱可变质量窗口信息非依赖采集的获取步骤如下,

1) 质量控制样本是通过将要进行代谢组学分析的两个以上来自同一物种的相同类型生物样本进行等体积移取或等质量称量合并制备;质量控制样本按实验需求完成相应的代谢组学前处理得到可用于色谱/质谱分析的进样溶液;

2) 液相色谱-质谱可变质量窗口信息非依赖采集方法为：首先在软件上设定10个及以上可变质量窗口数目后依据代谢物一级质量分布情况自动分配可变质量窗口，然后根据可变质量窗口采用信息非依赖质谱采集模式在不同碰撞能下对代谢物二级信息进行采集。

3.根据权利要求1所述的拟靶向代谢组学分析的最优离子对挑选方法，其特征在于：一级质谱母离子信息和母离子对应的二级质谱信息的获取步骤如下,

1）原始数据通过峰识别软件处理获得一级质谱信息，包括母离子m/z，保留时间，母离子面积信息；

2) 原始数据经abf格式转换后，经去卷积软件MS-DIAL处理，获得单个碰撞能下二级质谱信息，包含进行二级质谱碎裂的母离子m/z，保留时间，子离子m/z，子离子强度信息。

4.根据权利要求1所述的拟靶向代谢组学分析的最优离子对挑选方法，其特征在于：验证最优离子对和适用于拟靶向代谢组学分析的最优离子对列表的步骤如下，

1）采用液相色谱-三重四级杆质谱对候选离子对列表中的离子对检测，经过谱图分析后将能检测到的离子对保留，不能检测到的去除；

2）统计被保留的离子对，若同一代谢物在多个碰撞能下均存在离子对，则优先保留特征离子对响应最大者，得到用于拟靶向代谢组学分析的最优离子对列表。