[发明专利]一种促进油菜愈伤组织增殖、分化和生根的方法及培养基

说明书

本发明属于油菜培养技术领域，公开了一种促进油菜愈伤组织增殖、分化和生根的方法及培养基，促进油菜愈伤组织增殖的培养基为2mg/L 6‑BA+0.4mg/L 2,4‑D，硝态氮与铵态氮比例为1:1，总浓度为80mM/L；促进油菜愈伤组织分化的培养基为3mg/L 6‑BA+0.1mg/L NAA，硝态氮与铵态氮比例为1.5:1，总浓度为100mM/L；促进油菜愈伤组织生根的培养基为0.15mg/L NAA，硝态氮与铵态氮比例为1.5:1，总浓度为50mM/L。本发明方法简单，可操作性强，可作为油菜愈伤组织增殖、分化和生根的方法，代替MS培养基。

技术领域

本发明属于油菜生长培养技术领域，尤其涉及一种促进油菜愈伤组织增殖、分化和生根的方法及培养基。

背景技术

目前，油菜愈伤组织增殖、分化及生根用到的培养基都是MS培养基，其氮源是由硝酸铵和硝酸钾提供，由于硝酸铵是制作炸药的原料，现阶段被国家严格管制，所以急需找到MS培养基中氮素的替代来源，使之能够达到甚至优于MS培养基。

油菜是十字花科(Cruciferae)芸薹属(Brassica)，包括甘蓝型油菜(Brassicanapus L.)、芥菜型油菜(Brassica juncea L.)、白菜型油菜(Brassica campestris L.)，是我国重要的油料作物之一。我国是世界上油菜面积和总产量最大的国家，油菜也是优质的蛋白饲料作物之一。我国油菜的主产区在长江流域及长江流域以南的区域，常年种植面积大约700万hm²，约占我国油料作物面积的1/3，总产量约1000万吨。油菜中的脂肪酸不仅可作为人类的食用油，还在医药、化妆品、涂料、表面活性剂、防腐剂、润滑剂等领域有广泛的应用。

油菜在人类的生活和农业生产上有着极其重要的作用，今育种学家把提高油菜产量和品质，培育抗病和抗逆油菜新品种作为重要内容来分析。近年来，油菜的品种改良已获得了巨大成就，通过杂交、回交等传统的育种方法，选育出了具有不同优良性状的油菜。然而，虽然传统育种取得了一定的成功，但是还是有其局限性，比如育种年限长，良品性状少且容易被忽略，工作量大，远缘杂交不亲和，杂种优势难以保持等方面。

目前，随着生物技术的发展，基因工程有可能解决这一系列的困难和问题，为油菜育种提供了新途径和新方法。随着分子生物学的快速发展，基因克隆、载体构建、高效再生体系的建立及遗传转化的分析得到了广泛的应用。30多年来油菜转基因分析得到了迅速发展，以转基因技术为核心的生物技术被誉为第二次“绿色革命”。

组织培养技术被广泛地应用到油菜育种中，并得到了大量不同优良特性的油菜种质资源高效的植株再生体系。氮素营养是调节植物生长的重要营养之一，氮是植物生长的生命元素，在植物生长的各个环节中起到至关重要的作用，

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)在油菜组织培养中使用最广泛的MS培养基来源得不到有效解决。

(2)现有技术不能通过调节培养基中氮源类型、浓度和比例找到最适合诱导外植体产生愈伤、分化和生根的培养基，用来取代MS培养基NH₄NO₃作为氮源受限问题。不能为高效的油菜再生体系、油菜组织培养提供依据。

解决上述技术问题的难度和意义：

解决上述难题，具有重要意义，现阶段硝酸铵也能通过复杂的审批程序购买到，但是价格昂贵，是以前为限制阶段的十几倍，这样明显增加了油菜组织培养的成本，使很多从事油菜组织培养的单位很难维持，所有找到合适的替代氮源不仅是解决油菜组织培养的问题，对所有的组织培养材料都具有较高的参考价值。

发明内容