[发明专利]一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法

说明书

本发明公开了一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法。本发明提供了一种基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了包含前述基因片段的重组载体、重组菌在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。本发明通过在水稻中转入NtZFP8基因片段，显著提高了水稻外植体和愈伤组织的再生能力，降低再生苗获得周期，得到具有利用价值的再生水稻植株。该方法能够显著提高水稻外植体和愈伤组织的再生能力，具有潜在的应用价值和经济效益。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法。

背景技术

植物组织培养技术是细胞全能性的体现。随着体细胞胚胎发生机理研究的深入及相关领域的迅猛发展，植物组织培养技术不仅在林木、农作物和园艺作物的快速繁殖方面得到广泛应用，也在基因工程品种培育中发挥着重要的作用。植物组织培养主要通过两个途径：其一为外植体直接诱导发生；其二是间接诱导发生，即通过体细胞诱导成胚性愈伤组织，愈伤组织再分化出芽，获得再生植株。分化效率是衡量植物组织培养技术效率的重要指标。

外植体和愈伤组织的分化是一个复杂的生物学过程，需要一些特定的物理和化学因子进行启动和维持，如受体植物的基因型，外植体类型和生理状态，培养基组成以及植物激素组成等。如在水稻中研究发现，不同基因型水稻，其愈伤组织分化能力不同，粳稻要明显优于籼稻(Lin Y J,Zhang Q.Optimising the tissue culture conditions for highefficiency transformation of indica rice[J].Plant Cell Reports,2005,23(8):540-547.)，同时也对籼稻愈伤组织转基因效率产生影响(Tie W,Zhou F,Wang L,etal.Reasons for lower transformation efficiency in indica rice usingAgrobacterium tumefaciens-mediated transformation:lessons from transformationassays and genome-wide expression profiling[J].Plant Molecular Biology,2012,78(1):1-18.)。外植体和愈伤组织分化效率问题增加了植物组织培养工厂化规模繁育的周期，提高了生产成本。

前人通过调节激素配比，改变培养基成分以及改良培养环境等措施提高分化能力(朱克明,陶慧敏,徐硕,等.水稻愈伤分化和再生研究进展[J].种子,2016(11):55-59.)。随着分子生物学技术的发展，通过植物生物工程进行受体植物改造从而提高再生能力已成为一个新的研究方向。

发明内容

本发明的目的是提供了一种新的基因，并通过将其转基因的方式来提高水稻组织培养分化效率。

本发明首先提供了一种基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种重组载体在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途，它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。优选地，所述重组载体是重组pCAMBIA1301载体。

本发明还提供了一种重组菌在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途，它包含前述重组载体，优选地，所述重组菌为重组农杆菌，进一步优选为重组农杆菌EHA105。

本发明还提供了一种蛋白在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示.

本发明还提供了一种提高水稻组织培养分化效率的方法，取前述的基因片段、重组载体、重组菌，转入水稻中，获得稳定表达前述蛋白的水稻植株或者水稻种子，即可。