[发明专利]一种通用型纳米孔检测传感器及检测方法

权利要求书

1.一种检测传感器，所述传感器包括纳米多孔膜、发卡型核酸序列1、发卡型核酸序列2和促发子核酸序列，所述纳米多孔膜包括包含多个纳米孔的膜结构，所述膜结构包括A面和B面，所述A面和B面通过所述纳米孔连通，所述纳米孔的孔径为1~1000nm，其特征在于：

所述发卡型核酸序列1从5’端到3’端依次包括序列a、b、c、d、b’；

所述发卡型核酸序列2从5’端到3’端依次包括序列b’、a’、e、b、d’；

所述促发子核酸序列从5’端到3’端依次包括序列b’、a’；

所述b与b’的核酸序列反向互补杂交，所述a与a’的核酸序列反向互补杂交，所述d与d’的核酸序列反向互补杂交，所述c、e包括核苷酸个数为1个以上的任意核酸序列；

所述促发子核酸序列连接在所述纳米多孔膜的A面和/或纳米孔的内表面中靠近A面的部分；所述纳米多孔膜的B面和/或纳米孔的内表面中靠近B面的部分带正电荷。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，所述传感器包括下述1）-4）中的至少一种：

1）所述c、e包括核苷酸个数为15个的任意核酸序列；

2）所述b、b’ 的核苷酸个数为18个；

3）所述a、a’、d、d’的核苷酸个数为6个；

4）所述纳米多孔膜为AAO膜，所述A面、B面、纳米孔的内表面修饰有氨基，所述促发子核酸序列通过戊二醛连接在所述纳米多孔膜的A面和/或纳米孔的内表面中靠近A面的部分的氨基上。

3.根据权利要求1或2所述的传感器，其特征在于，所述传感器包括下述1）-3）中的至少一种：

1）所述促发子核酸序列为序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列；或将序列表中SEQID №：1所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与所述促发子具有相同功能的核苷酸序列；

2）所述发卡型核酸序列1为序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列；或将序列表中SEQID №：2所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与所述发卡型核酸序列1具有相同功能的核苷酸序列；

3）所述发卡型核酸序列2为序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列；或将序列表中SEQID №：3所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与所述发卡型核酸序列2具有相同功能的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的传感器，其特征在于，所述的纳米多孔膜为非对称修饰，具体的制备方法包括：

将所述的纳米多孔膜浸泡在含氨基丙基三甲氧基硅烷的溶液中，置于70℃烘箱2个小时；

再将上述纳米多孔膜的A面和/或纳米孔的内表面中靠近A面的部分浸泡在含戊二醛的溶液中过夜；

然后将上述纳米多孔膜浸泡在含有胺化的所述的促发子核酸序列的HCR反应缓冲液中，28℃孵育3h；

最后上述的纳米多孔膜浸泡在含有所述的发卡型核酸序列1、发卡型核酸序列2的HCR反应缓冲液中，28℃孵育6个小时即得。

5.根据权利要求4所述的传感器，其特征在于，所述传感器还包括核酸序列3和核酸序列4；

所述核酸序列3从5’端到3’端依次包括序列f、g、x’；

所述核酸序列4从5’端到3’端依次包括序列h、i、j；

所述g、i中包含内切酶识别和/或酶切核酸序列的反向互补杂交序列；

所述x’包含与待测靶标核酸序列互补杂交的核酸序列；

所述f、h或j均各自包含a’、e。

6.根据权利要求5所述的传感器，其特征在于，所述传感器还包括下述1）-3）中的至少一种：

1）所述f、h或j均各自从5’端到3’端依次包括b’的部分核酸序列、a’、e、b的部分核酸序列；

2）所述f、h、j任意一条序列的反向互补杂交序列，与所述发卡型核酸序列2的互补杂交的△G，是所述发卡型核酸序1与所述发卡型核酸序2互补杂交的△G的两倍以上；

3）所述f、h、j任意一条序列的反向互补杂交序列，与所述发卡型核酸序列2互补杂交所需要的最低反应温度，要低于所述发卡型核酸序1或所述发卡型核酸序2自身的解链温度Tm。