[发明专利]一种逆转录转座基因L1-FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途

说明书

本发明公开了一种逆转录转座基因L1‑FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途。所述逆转录转座基因L1‑FGGY的核酸序列为SEQ ID NO.1。所述逆转录转座基因L1‑FGGY的上游检测引物核酸序列为SEQ ID NO.2；下游检测引物核酸序列为SEQ ID NO.3。所述逆转录转座抑制剂奈韦拉平或依法韦仑可以抑制逆转录转座基因L1‑FGGY的表达水平，用于治疗肺鳞癌。本发明公开的L1‑FGGY逆转录转座基因可以作为一个新的肿瘤标志物，对L1‑FGGY的检测可以用以进行肺鳞癌的早期诊断、分子分型，以及预后评估，同时L1‑FGGY还可能成为一个潜在的治疗靶点，应用于肺鳞癌的临床治疗，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及DNA重组技术，更具体地是一种逆转录转座基因L1-FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途。

背景技术

肺癌是最常见的恶性肿瘤，目前在全世界范围内发病率及病死率均位居前列，5年生存率仅约15.6％，主要原因是约75％的患者在诊断时已是晚期肺癌，早期诊断的不足造成了肺癌患者的预后差。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％以上，主要包括肺腺癌、肺鳞癌和大细胞肺癌，其中肺鳞癌占NSCLC的30％左右。近年来，EGFR、ALK等肿瘤分子标志物的深入研究，大大促进了肺腺癌的分子诊断和靶向治疗。但是肺鳞癌中却缺乏有效的早期诊断和预后预测的分子标志物，这不仅影响肺鳞癌的早诊早治，也在一定程度上导致了肺鳞癌的临床疗效差强人意。目前相对肺腺癌，肺鳞癌的治疗手段非常少，只能依靠常规的放化疗。因此，针对肺鳞癌，依托目前快速发展的高通量基因检测和大数据分析技术，筛选可用于肺鳞癌的早期诊断、分子分型、预后评估和靶向治疗的基因标志物，同时探索有效的治疗方法及其适应症，对于肺鳞癌的精准诊疗具有至关重要的意义。

肿瘤是由细胞中多种基因突变积累所引起的疾病。近年来，随着测序技术的发展，多种基因变异形式，包括点突变、插入/缺失、拷贝数变异、基因重排均被发现可参与肺癌的发生和发展过程，其中多种罕见基因重排，比如ALK融合和ROS1融合，成为肺腺癌诊治的关键靶点，但在肺鳞癌中却鲜见这些融合基因标志物。融合基因，属于一种染色体重排的现象，是指两个或多个基因的编码区首尾相连，位于同一套调控序列(包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等)控制之下，构成的嵌合基因。虽然融合基因近年来得到越来越多的关注，但实际上融合基因并不是肿瘤中最常见的基因重排现象。本实验室前期工作发现，在肺鳞癌中存在另一种高频的染色体重排的现象，它发生重排的区域不是基因的编码区，而是非编码区，这种非编码区的染色体重排被称为逆转录转座(retrotransposition)。逆转录转座在人类基因组中广泛发生，致使人类基因组中产生散在分布的重复序列，这些重复序列构成了人类大约一半的基因组DNA。有文献证实逆转录转座存在于多种肿瘤组织中，如结肠癌、前列腺癌、卵巢癌和肝癌，其发生频率高，可能是一种潜在的肿瘤基因标志物。但由于逆转录转座缺乏有效的筛选手段，因此针对其作为基因标志物的研究一直迟滞不前。近年来，随着高通量基因检测和生物信息分析技术的提高，多种不同形式的逆转录转座子被鉴定出来，并逐渐阐明其与多种疾病的相关性。

逆转录转座被定义为通过转座元件将RNA中间体复制整合到基因组DNA的机制，主要包括3种类型：即长散布元件(LINE-1，也称为L1)，短散布元件(SINE)和长末端重复(LTR)。其中LINE-1是目前人体内存在的唯一具有自主转座活性的转座子，约占人类基因组的17％。LINE-1通过RNA中间体自我复制，并插入整合到基因组中，从而导致遗传的不稳定性，并影响附近基因的表达。1988年，科学家首次意识到逆转录转座的病理作用，Kazazian等发现LINE-1序列的插入可导致A型血友病，目前已证实由LINE-1介导的遗传疾病已经有超过100例的报道。研究显示，LINE-1的转座可以通过激活原癌基因或失活抑癌基因导致癌症发生。在乳腺导管腺癌中发现，LINE-1的转座能引起的MYC癌基因的重排和扩增，导致癌症发生。在结肠癌中，LINE-1转座插入APC抑癌基因的最后一个外显子后使APC基因失活，最终导致癌症发生。这两个研究结果为LINE-1转座影响目的基因的表达和功能，从而导致肿瘤发生提供了直接的证据。虽然，LINE-1的复制和转座可导致包括肿瘤在内的基因疾病，但对于其对肺鳞癌发生发展的影响目前尚无报道。