[发明专利]一种培养苹果三倍体种质的方法

权利要求书

1.一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取‘四倍体嘎拉’ב寒富’的成熟果实，去掉果肉，取出种子，对种子进行消毒处理后在无菌条件下剥去种皮；

(2)将剥去种皮的杂种胚接种在装有培养基的容器内进行培养；

(3)杂种胚离体培养30d，可发育成10cm高的全苗，在无菌条件下采取叶片及根尖，进行倍性鉴定并将鉴定为三倍体的植株去掉根系，剪接成1.5cm的茎段转移到继代培养基中，一个月左右继代一次；

(4)当每个株系增殖达到10株以上时，接种到生根培养基中进行生根，当植株根系长到2-3cm时，打开瓶口练苗3-7d，移栽到田间营养钵中，进行常规田间管理，即得苹果三倍体种质。

2.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的消毒处理的操作为：将种子放入100ml三角瓶中，依次用70％的乙醇浸泡30s，0.1％的升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次。

3.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的培养基包括F14培养基中填加1g/L活性炭、500mg/L水解乳蛋白、150mg/L抗坏血酸、15g/L蔗糖、0.4mg/L6-BA、0.2mg/LNAA、6g/L琼脂的混合。

4.根据权利要求3所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，所述培养基的制备方法为：以常规方法将培养基中各组分混合后用0.7％琼脂条固化培养基，以1mol/L的NaOH将培养基的pH调整到5-7，将培养基分装到试管中，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20分钟。

5.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(2)中所述培养的温度为：25±2℃，光照条件为：黑暗或光照强度为1500lx，光照时间为14h/d。

6.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的继代培养基包括MS培养基中填加0.4mg/L6-BA、0.2mg/LIAA、30g/L蔗糖的混合。

7.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的生根培养基包括1/2MS培养基中填加0.15mg/LIBA、15g/L蔗糖的混合。

8.根据权利要求1所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，步骤(4)中所述移栽的操作为：当植株根系长到2-3cm时，打开瓶口练苗3-7d，取出杂种苗，清水洗掉根部残余培养基，杂种苗根部浸沾0.5％氯化钙溶液5min，移栽入装有育苗基质的营养钵中。

9.根据权利要求8所述的一种培养苹果三倍体种质的方法，其特征在于，所述育苗基质的处理操作为：将草炭∶蛭石∶珍珠岩以2∶1∶0.5的质量比混合均匀，在杂种苗移栽前高压灭菌30分钟。