[发明专利]一种崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的分离制备方法

说明书

本发明公开了一种基于高速逆流萃取法从崖柏中分离制备高纯度单体崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇的方法。本发明以崖柏叶为原料，通过水蒸气蒸馏法获得挥发油样品，采用高速逆流色谱萃取法进行分离纯化，得到单体崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇，所述的溶剂体系由正构烷烃、乙酸乙酯或正丁醇和甲醇或乙醇构成，本方法所得崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇纯度分别高达93%、97%和96%以上。该方法可控性强，分离效果好，纯度高，具有规模化制备前景。

技术领域

本发明涉及一种基于高速逆流色谱法从崖柏叶中分离制备高纯度崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的方法。

背景技术

崖柏(Thuja sutchuenensis)为柏科崖柏属常绿乔木，为我国特有的珍稀濒危植物。该物种在1892年被法国传教士首次发现，曾被认为是已灭绝的3种中国特有植物之一，1999年又被重新发现，分布在我国重庆市东北的城口县大巴山自然保护区和开县雪宝山自然保护区、四川省万源市花萼山自然保护区和湖北省保康县五道峡自然保护区(在甘肃天水地区也有发现)。《本草纲目》中介绍柏有极高的药理价值：“柏性后调而耐久，坚凝之质，乃多寿之木，可以服……无毒，除风湿，安五脏，久服，令人润泽美色……兴阳道，益寿，去百邪鬼魅，润肝、养心气，润肾燥”。

研究表明，崖柏的根、茎、叶中含有多种萜类化合物，这些萜类化合物脂溶性强，分子量小，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降血压、驱虫、抗炎、利尿、祛痰、健身强体的功效。目前有从崖柏中提取崖柏精油，应用于医疗保健、食品工业、果蔬保鲜、日用化妆品等领域。有报道，王亚琪等采用超临界CO₂萃取崖柏精油，鉴定出罗汉柏烯、α-雪松醇和花侧柏烯等28种萜烯类化合物。本发明主要从崖柏叶中提取精油化合物，其中罗汉柏烯、α-雪松醇具有明显的抑菌作用，而关于高速逆流色谱制备分离还鲜于报道。目前对崖柏烯的研究多集中于定性分析，罗汉柏烯和α-雪松醇主要采用柱层析分离方法获得，工艺复杂，制备量小。高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography, HSCCC)是一种不需要任何固体支撑物的液-液色谱分离技术，避免了固态载体带来的各种问题——样品易被吸附、损耗和变性，HSCCC具有较高峰型分辨率、分离环境缓和、高效、快速、连续、回收率高和分离量大等优点。HSCCC能直接分离大量粗提物样品或合成混合物，分离结果能够达到相当高的纯度。因此，HSCCC具有操作简便，理论回收率为100％，重现性好和分离效率高、分离量较大的特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种单体崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的制备方法，其克服了固态支持物或载体不可逆吸附、损耗和变性，使分离回收率提高，且节约溶剂、操作简便。

本发明的方案是：经水蒸气蒸馏法从崖柏叶中获得的挥发油物质，通过高速逆流色谱法进行分离纯化，获得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。选择的溶剂体系由3个组分构成，A组分为正构烷烃，B组分为乙酸乙酯或正丁醇，C组分为甲醇或乙醇，A、B、C三组分的体积比为5:（2-4）:（1-4），以上相作为固定相，下相作为流动相。

所述正构烷烃选自正戊烷、正己烷、正庚烷中的至少一种。

首先在分液漏斗中按适当的比例配制上述逆流溶剂体系，摇匀后静置分层。将挥发油溶于适量流动相中待用，进样前先用固定相充满整个逆流色谱仪管路，然后使柱子转动，调节逆流主机转速为800-1000r/min，以0.5-3.0mL/min的流速将流动相泵入管路，当固定相和流动相在主机中建立动态平衡后，由进样阀进入制备好的粗提物，根据检测谱图接收目标成份。