[发明专利]一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，包括以下步骤：(1)甘薯品种基因组DNA提取；(2)PCR扩增；扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物，则视为抗病品种。本发明利用分子标记技术进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可加快甘薯抗蔓割病育种的进程，提高甘薯抗蔓割病育种效率。与现有技术相比，本发明用于鉴定甘薯品种蔓割病抗性的周期短、效率高、可靠性更强。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法。

背景技术

甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam,2n＝6X＝90)是重要的粮食、饲料和工业原料用作物。我国是甘薯种植大国，年均种植面积为367万hm2左右，年均产量约占全球总产量的75.3％。甘薯蔓割病又称镰刀菌枯萎病(Fusarium wilt)，在世界大多数甘薯产区发生流行。该病是中国南方薯区发生广、危害重的真菌性维管束枯萎病，主要分布在浙江、福建、广东、广西、台湾和海南等省(自治区)，一般减产10％～20％，重者达50％以上。受该病影响，甘薯的植株根、主蔓、支蔓、叶柄等不同部位均可见纵裂症状，但多发生在近土壤的拐头部分，拐头发病危害最大，发病愈早受害愈重，种植感病品种是引起该病流行的重要条件。

解决甘薯生产上蔓割病发生最根本、经济有效的方法就是推广抗蔓割病甘薯品种，可有效减轻此病的发病面积和危害程度。目前的甘薯常规抗蔓割病育种在获得F1代种子及其实生苗之后需要进行甘薯抗病性鉴定，传统的抗病鉴定方法所需环节繁琐，包括实生苗播种、扩繁、剪苗、接种、栽种、调查等环节，周期长(从播种出苗到鉴定完毕大概要100天左右)、结果可靠性差，另外甘薯是高度杂合的同源六倍体植物，遗传背景复杂，亲本的选择和组配有一定盲目性。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，利用分子标记技术进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可加快甘薯抗蔓割病育种的进程，提高甘薯抗蔓割病育种效率。

本发明是这样实现的：

一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，包括以下步骤：

(1)甘薯品种基因组DNA提取；

(2)利用以下特异引物进行PCR扩增：

上游引物：CTGCGTACGAATTACATCCTCAAAACTTTTAGATA

下游引物：GAGTCCAAACCGGATTAACTCAATCGAAATGGACG；

(4)扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物，则视为抗病品种。

进一步地，步骤(2)所述PCR扩增的反应体系总体积为20μL，其中上、下游引物各1μL，模板DNA 1.5μL、Taq PCRMaster Mix 10μL、ddH2O 6.5μL；

反应程序为：94℃5min，94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，55℃1min，72℃10min，35个循环。

本发明具有如下优点：

1、提高效率：与现有技术相比，本发明用于鉴定甘薯品种蔓割病抗性的周期短、效率高，相比原有的传统接种鉴定，时间节省90天左右(传统的鉴定技术自种子播种出苗算起时间大概在100天左右)；利用分子标记技术在甘薯育种的早期通过分子标记技术对F1代实生苗进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可有效提高甘薯抗蔓割病育种效率，缩短甘薯抗蔓割病育种的进程。

2、提高可靠性：由于本发明的分子鉴定方法是通过甘薯基因组DNA经特异引物扩增目的片段来实现的，所以得出的结论可靠性更强，远胜于传统鉴定方法。

附图说明