[发明专利]对RNA分子进行处理的方法及试剂盒和复合体

说明书

本发明涉及基因测序领域，具体涉及一种对RNA分子进行处理的方法及试剂盒和复合体。所述方法包括：基于所述RNA分子，形成第一RNA‑DNA复合体，所述第一RNA‑DNA复合体包括：双链区，所述双链区由匹配DNA单链和匹配RNA单链形成；DNA单链区，所述DNA单链区与所述匹配DNA单链的5’末端相连；以及RNA单链区，所述RNA单链区与所述匹配RNA单链的5’末端相连；在所述匹配RNA单链的3’末端连接具有平末端的双链DNA接头，以便获得第二RNA‑DNA复合体。还提供了一种对RNA处理的试剂盒。利用该方法和试剂盒，可以简化接头连接步骤，降低成本，以实现对小RNA的检测或建库测序。

技术领域

本发明涉及基因测序领域，具体涉及一种对RNA分子进行处理的方法及试剂盒和复合体。

背景技术

小RNA(Small RNA)是生命活动的一类重要调控因子，长约10～40nt，广泛存在生物体中。它可通过参与调节mRNA降解、翻译抑制、异染色质形成等多种途径，在生物体基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等过程中发挥着重要作用。

新一代高通量测序可以在一次测序中获得样本细胞中小RNA的序列信息，能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同疾病状态下已知和未知的小RNA表达水平及其表达差异，为研究小RNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具，尤其能通过测序鉴别新的小RNA。由于该技术的应用，越来越多的小RNA被发现和功能鉴定。而它在细胞内重要的调控功能，也使其具有作为疾病诊断标记物或药物靶标的潜力，并将广泛应用于疾病诊断、个性化治疗和预后等领域。

然后对于小RNA分子的测序手段还需要进一步改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种对RNA分子进行处理的方法，可以借助于高通量测序常规建库的酶及试剂，实现对小RNA的检测或建库测序，简化接头连接步骤，降低成本。

本发明是基于发明人的如下发现获得的：

针对小RNA的测序或者分析技术，通常是将小RNA从总的RNA中分离出来，然后在小RNA的两端加上特定接头后，体外反转录成cDNA后，扩增后利用测序仪对于DNA片段进行单向末端直接测序。而通过直接对小RNA连接接头，反转录进行测序或者分析的技术，存在一些技术上的难点以及成本较高的问题，主要表现在：由于建库模板为RNA，比较难直接利用常规试剂进行接头的连接，需要利用特殊的酶进行加接头反应，因此成本比较高。而且其次模板的片段太小，模板加上接头后，比较难与各种dimer(二聚物)进行分离。

为此，本发明提出了如下技术方案：

根据本发明的第一方面，本发明提出了一种对RNA分子进行处理的方法，包括：基于所述RNA分子，形成第一RNA-DNA复合体，所述第一RNA-DNA复合体包括：双链区，所述双链区由匹配DNA单链和匹配RNA单链形成；DNA单链区，所述DNA单链区与所述匹配DNA单链的5’末端相连；以及RNA单链区，所述RNA单链区与所述匹配RNA单链的5’末端相连；在所述匹配RNA单链的3’末端连接双链DNA接头，以便获得第二RNA-DNA复合体，所述双链DNA接头具有平末端。通过形成DNA和RNA的复合体结构，可以用来捕获RNA分子，尤其适用于捕获小片段RNA分子，实现RNA分子核酸信息的捕获，利于后续对RNA分子的建库和测序。

根据本发明的实施例，以上对RNA分子进行处理的方法可以进一步附加如下技术特征：

根据本发明的实施例，利用T4连接酶在所述匹配RNA单链的3’末端连接所述双链DNA接头。T4连接酶或者称T4DNA连接酶可以修补DNA-RNA复合体上的单链缺口，将双链DNA接头连接到所述匹配RNA单链的3’末端，从而可以利用DNA探针捕获RNA分子，形成第二RNA-DNA复合体结构，利于后续对RNA分子的建库和测序。