[发明专利]一种用于预测膀胱癌的肿瘤标志物

说明书

本发明公开了一种用于预测膀胱癌的肿瘤标志物，该肿瘤标志物为DDX46，DDX46基因扩增引物的基因靶点序列为5’‑GATTGTGATTGAAGAAGAA‑3’，DDX46基因上游引物序列为5’‑AAAATGGCGAGAAGAGCAACG‑3’，DDX46基因下游引物序列为5’‑CATCATCGTCCTCTAAACTCCAC‑3’。本发明应用高通量测序技术对8例早期初诊膀胱癌患者的膀胱癌组织和正常组织进行检测，结果发现DDX46基因在膀胱癌组织中高表达，进一步通过RT‑PCR的方法验证了9例患者的膀胱癌组织和正常组织中DDX46mRNA表达，IHC的方法验证了56例膀胱癌及10例正常组织石蜡切片中DDX46蛋白的表达。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种基因及其扩增引物，尤其涉及一种DDX46基因扩增引物及其作为膀胱癌分子标志物中的应用。

背景技术

膀胱癌作为泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，居中国泌尿系肿瘤的首位，在西方仅次于前列腺癌，且膀胱癌的发病呈现逐年上升和年轻化的趋势。据2015年中国癌症调查数据显示，在男性最常见的十种肿瘤中，膀胱癌的发病率2000～2011年期间有上升的趋势，但死亡率保持相对稳定。膀胱癌在初次诊断时，约70％～75％为非肌肉浸润性膀胱癌，然而局部复发率高达70％，其中约20％的初诊非肌层浸润性膀胱癌会进展为肌层浸润性膀胱癌，具有易复发的特点。由于膀胱癌病因复杂，其发生发展是一个多因素，多层面，多通路的复杂过程，发病机制并不明确，临床上亟待找到能早期诊断、复发检测的分子标志物及靶向治疗的作用靶点。

DDX46基因，属于DEAD-box家族成员，位于染色体5q31.1上。有研究表明DDX46可通过调节mRNA前体的可变剪切影响消化器官和脑部的发育，还与造血细胞的分化发育密切相关。最近有学者指出，DDX46基因高表达与食管鳞状细胞癌、结肠癌及骨肉瘤的发生发展密切相关。但是，DDX46基因在膀胱癌中的作用尚不清楚，且未见有文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一种用于预测膀胱癌的肿瘤标志物，通过寻找DDX46基因的靶点序列，设计DDX46基因的引物序列，构建了干扰DDX46基因表达的慢病毒载体，通过敲低膀胱癌细胞系(5637、T24)中DDX46基因表达发现抑制了膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移，诱导细胞凋亡；动物实验阐明DDX46基因抑制膀胱癌T24细胞成瘤的能力。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种用于预测膀胱癌的肿瘤标志物，该肿瘤标志物为DDX46，DDX46基因扩增引物的基因靶点序列为5’-GATTGTGATTGAAGAAGAA-3’，DDX46基因上游引物序列为5’-AAAATGGCGAGAAGAGCAACG-3’，DDX46基因下游引物序列为5’-CATCATCGTCCTCTAAACTCCAC-3’。

所述DDX46基因扩增引物在鉴定膀胱癌中的应用。

本发明应用高通量测序技术对8例早期初诊膀胱癌患者的膀胱癌组织和正常组织进行检测，结果发现DDX46基因在膀胱癌组织中高表达，进一步通过RT-PCR的方法验证了9例患者的膀胱癌组织和正常组织中DDX46mRNA表达，IHC的方法验证了56例膀胱癌及10例正常组织石蜡切片中DDX46蛋白的表达。

附图说明

图1为慢病毒敲低膀胱癌T24和5637细胞DDX46基因表达；

图2为Celigo细胞计数检测细胞增殖图；

图3为MTT实验检测细胞活力图；

图4为克隆形成实验检测细胞增殖图；

图5为Transwell侵袭实验及划痕实验图；

图6为流式细胞术检测细胞凋亡图。

图7为裸鼠成瘤实验动物及瘤体图。

具体实施方式