[发明专利]谷氨酰胺转氨酶介导的细胞膜表面修饰方法有效
申请号: | 201810563286.2 | 申请日: | 2018-06-04 |
公开(公告)号: | CN110551675B | 公开(公告)日: | 2021-05-11 |
发明(设计)人: | 杜亚楠;齐春晓 | 申请(专利权)人: | 清华大学 |
主分类号: | C12N5/00 | 分类号: | C12N5/00;C12N5/0775 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;张立娜 |
地址: | 100084 北京市海淀区北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 谷氨酰胺 转氨酶 细胞膜 表面 修饰 方法 | ||
1.一种谷氨酰胺转氨酶介导的细胞膜表面修饰的非疾病诊断治疗性方法,包括如下步骤:利用谷氨酰胺转氨酶将修饰物连接到靶细胞的细胞膜表面的底物蛋白上;所述修饰物上含有谷氨酰胺残基;所述底物蛋白上含有赖氨酸残基;
所述靶细胞为能够表达或经过诱导表达谷氨酰胺转氨酶的细胞;
所述修饰物包含修饰区和功能区;所述修饰区上含有谷氨酰胺残基;
所述修饰区为GQLKH;所述功能区为LEQQEG;
所述方法包括如下步骤:
(a1)根据修饰目的确定所述修饰物的所述功能区和所述修饰区,并合成所述修饰物;
(a2)用基础细胞培养基对所述修饰物进行稀释,使所述修饰物在稀释液中的浓度为0.1mM-5mM,并调整pH到7.4-7.6,得到修饰工作液;
(a3)将所述靶细胞悬浮于所述修饰工作液中,37℃条件下,孵育15-25分钟。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述靶细胞为间质细胞、内皮细胞或免疫细胞。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(a3)中,将所述靶细胞悬浮于所述修饰工作液中,其中所述靶细胞的含量为105-106个/mL。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:在步骤(a3)之后,还包括如下步骤:将孵育液离心,去掉所述修饰工作液;然后用HBSS冲洗修饰后的所述靶细胞;再离心,去掉清洗液。
5.利用权利要求1-4中任一所述方法制备得到的修饰后细胞。
6.权利要求1-4中任一所述方法在制备用于改变细胞膜表面特性的产品中的应用。
7.权利要求1-4中任一所述方法在制备用于调控细胞靶向性、细胞粘附性、细胞迁移能力、细胞增殖能力、细胞分化能力和/或细胞抗药性的产品中的应用。
8.权利要求5所述修饰后细胞在制备用于细胞治疗的药物中的应用。
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