[发明专利]一种多色荧光标记样本的塑性包埋方法

说明书

本发明公开一种多色荧光标记样本塑性包埋方法，包括：将生物样本进行预处理；将预处理后的生物样本依次放入不同质量浓度的SBB和DTT的树脂溶液中进行梯度渗透，每个浓度0.5‑3小时，随后再次放入新鲜的加入SBB和DTT的树脂溶液中继续渗透6‑12小时；用树脂渗透液对所述经梯度渗透后的生物样本进行包埋、加热后得到包埋的荧光标记样本。本发明提供的包埋方法适用于多种树脂包埋，同时能适用于多种颜色荧光标记样本。

技术领域

本发明涉及一种生物工程技术领域，具体涉及一种多色荧光标记样本塑性包埋方法。

背景技术

目前，通过荧光标记技术，能在一个样本上同时标记出各种信息，对深入研究生物体的结构和功能具有重要作用。

现有的树脂包埋方法，采用纯树脂或者溶解SBB的树脂样本渗透包埋荧光生物组织，可获得背景荧光减少的样品，它的不足之处在于：这种包埋方法只适用于绿色荧光蛋白标记的生物组织，不适用于其他荧光(例如红色荧光蛋白、各种荧光素类探针等)标记，从而大大限制了其应用，例如图1所示。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种能适用于多种颜色荧光标记样本的包埋方法。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案为采用一种多色荧光标记样本塑性包埋方法，包括：

将生物样本进行预处理；

将预处理后的生物样本依次放入0.5-0.7wt％DTT的梯度浓度的酒精溶液中进行渗透，每个浓度0.5-3小时，随后在不同质量浓度的树脂溶液中继续渗透6-12小时，所述不同浓度的树脂溶液包括0.1-0.2wt％的SBB和0.7-1wt％的DTT；

用树脂渗透液对所述经梯度渗透后的生物样本进行包埋、加热后得到包埋的荧光标记样本。

优选的，所述对生物样本进行预处理包括：

将生物样本在多聚甲醛固定液中固定12-24小时；

将固定后的生物样本在漂洗液中漂洗6-12小时；

将所述漂洗后的生物样本依次放入冰水预冷却的50％、70％和95％或100％乙醇溶液中进行梯度脱水，每次5分钟到2小时。

优选的，所述不同浓度的树脂溶液的质量浓度为40％～60％、60％～70％、70～90％和90％～100％。

优选的，所述不同浓度的树脂溶液的质量浓度分别为50％、70％、85％和100％。

优选的，所述梯度浓度酒精溶液的质量浓度分别为50％、70％、85％和100％。

优选的，所述用树脂渗透液对所述经梯度渗透后的生物样本进行包埋具体为：

将梯度渗透后的生物样本放置于包埋模具中，随后在模具中充满树脂渗透液。

优选的，所述树脂渗透液和树脂溶液中的树脂具体为GMA树脂。

优选的，加热后得到包埋的荧光标记样本具体为：

将所述填充后的模具在35℃-40℃下加热12到24小时。

优选的，所述树脂溶液的溶剂为95％乙醇。

优选的，所述生物样本选自可发射荧光的动物组织。