[发明专利]用于检测融合基因的混合基因、标准质粒、试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测融合基因的标准质粒，其包括一种混合基因的序列，其特征在于，所述混合基因的序列如SEQ ID NO:1所示，所述标准质粒的序列如SEQ ID NO:6所示。

2.一种用于检测融合基因的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的标准质粒。

3.一种如权利要求1所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1、对需要进行荧光定量的融合基因和内参基因设计相对应的引物探针；

步骤S2、根据步骤S1所述的引物探针截取所述引物探针对应的融合基因和内参基因的基因序列；

步骤S3、将步骤S2中截取的所述融合基因的基因序列和所述内参基因的基因序列进行基因合成，得到序列如SEQ ID NO:1所示的混合基因；

步骤S4、将步骤S3中的所述混合基因插入到PUC57质粒，得到如SEQ ID NO:6所示的标准质粒；

其中，在步骤S3中，所述混合基因的序列由如SEQ ID NO:2所示的BCR-ABL融合基因序列、如SEQ ID NO:3所示的AML-ETO融合基因序列、如SEQ ID NO:4所示的PML-RARA融合基因序列和如SEQ ID NO:5所示的ABL内参基因序列组成。

4.如权利要求3所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述BCR-ABL融合基因的引物和探针分别为如SEQ ID NO:7所示的BCR-ABL-F、如SEQ ID NO:8所示的BCR-ABL-R和如SEQ ID NO:9所示的BCR-ABL-Probe。

5.如权利要求3所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述AML-ETO融合基因的引物和探针分别为如SEQ ID NO:10所示的AML-ETO-F、如SEQ ID NO:11所示的AML-ETO-R和如SEQ ID NO:12所示的AML-ETO-Probe。

6.如权利要求3所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述PML-RARA融合基因的引物和探针分别为如SEQ ID NO:13所示的PML-RARA-F、如SEQ ID NO:14所示的PML-RARA-R和如SEQ ID NO:15所示的PML-RARA-Probe。

7.如权利要求3所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述ABL内参基因的引物和探针分别为如SEQ ID NO:16所示的ABL-F、如SEQ ID NO:17所示的ABL-R和如SEQ ID NO:18所示的ABL-Probe。

8.如权利要求3所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，还包括：

步骤S5、对步骤S4制备的所述标准质粒进行验证；

步骤S51、测定所述标准质粒的浓度、吸光度和拷贝数；

步骤S52、将所述标准质粒进行梯度稀释；

步骤S53、制备荧光定量PCR体系；

步骤S54、进行荧光扩增检测。