[发明专利]包裹质粒DNA的阳离子脂质体复合物

说明书

本发明公开了一种包裹质粒DNA的阳离子脂质体复合物，由阳离子脂质体及其包裹的质粒DNA组成，其中，所述阳离子脂质体由DOTAP与辅助脂质构成，所述质粒DNA为至少一种促进免疫反应的细胞因子的质粒载体；本发明应用免疫治疗的原理，通过该脂质体的保护，使促免疫细胞因子和抗血管生成蛋白质的重组基因得以在血液里转运，转染肿瘤组织并表达；所述脂质体复合物兼有对肿瘤细胞组织造成缺血性坏死的功能，帮助机体对肿瘤抗原的识别。本发明的脂质体GM‑csf复合物对早期EMT6乳腺癌细胞肺转移癌治愈率达100%，对终晚期EMT6细胞肺转移癌治愈率达到33%；利用GM‑csf基因与重组VEGFR基因的脂质体复合物联合应用，对终晚期EMT6细胞肺转移癌治愈率提升到50%。

技术领域

本发明涉及肿瘤的基因治疗技术领域，尤其涉及一种包裹质粒DNA的阳离子脂质体复合物及其制备方法。

背景技术

细胞分裂是机体发育和组织修复的正常过程。母细胞分裂成两个相等的子细胞，这些子细胞可能进一步分化，装配新的组织，或者取代老化的细胞或受到伤害的组织。当机体不再需要更多的细胞时，健康细胞通过接触抑制、细胞因子、生长激素调控等手段，不再分裂。当健康细胞产生一系列基因突变，细胞分裂不再受到机体的调控，从而形成肿瘤细胞。肿瘤细胞是不断分裂的细胞，生成瘤块，并能通过血液向远端的组织进行转移。一般人们所说的“癌症”习惯上泛指所有恶性肿瘤。恶性肿瘤具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个不断产生基因突变、受多因子影响的复杂过程。

根据中国国家肿瘤防治中心的统计，癌症(恶性肿瘤)也是目前中国疾病导致死亡的头号杀手。其中，又以肺癌的发病率最高。每年在中国有60万患者死于肺癌，是十大癌症死亡原因之首，且有逐年增加的趋势。根据2010年美国癌症协会的报告，癌症是美国仅次于心脏病致死的主要原因。约31％的男性和26％的女性死于肺癌或支气管癌。癌症治疗的常规手段包括手术，化疗，放疗。理论上，以手术完全移除肿瘤细胞，癌症是可以被治愈的。对早期或较早期实体肿瘤来说，手术切除仍然是首选的治疗方法。化疗和放疗均显示出较大的副作用。在过去以传统放化疗和手术治疗为主要治疗手段的几十年中，在改善长期结果和总体生存率方面取得的进展相对较小，特别是病人诊断出肿瘤时往往已是中晚期，患者5年生存率很低。概念上迫切需要新方法，即有针对性的药物。2010年美国药物和食品管理局(FDA)批准的第一个细胞免疫的肿瘤治疗技术(Provenge)，拉开了肿瘤免疫治疗的大幕。2014年至2017年有5个针对PD-1/PD-L1免疫检测靶点的抗体药物获批上市。以CAR-T为代表的细胞免疫疗法目前也已经有两款上市，即诺华的Kymriah以及Kite公司的Yescarta。这些药物或治疗技术在肿瘤治疗的长效性和延长患者生存率方面表现优异，并且副作用降低，PD-1/PD-L1抗体成为目前最好的抗癌药，标志着在细胞、分子和机体各个层面的免疫治疗正式成为肿瘤治疗的主角，癌症治疗已进入免疫治疗时代。肿瘤免疫治疗未来的发展方向不仅是从根本上替代化疗和放疗，甚至可能会替代一部分手术，拥有广阔的前景。

现代肿瘤免疫治疗最重要发现是细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte，CTL)能够抑制肿瘤生长，而且是杀死肿瘤细胞的主要力量。无论是基于细胞、免疫抑制检查点、增强免疫细胞因子和溶瘤病毒免疫治疗的方案，都是围绕CTL的扩增和调控设计的，主要依仗携带 CD8+、CD4+等表面抗原的T淋巴细胞对肿瘤细胞的识别和清除。T淋巴细胞表面抗体识别多肽抗原，包括肿瘤抗原(Neoantigen)。肿瘤抗原是专一地反映肿瘤细胞中基因突变产生的变异多肽，因此针对肿瘤抗原产生的T淋巴细胞具有非常高的肿瘤专一性，毒副作用小。

癌症免疫周期包括几个连续的步骤：癌细胞产生的肿瘤抗原被树突细胞捕获。树突细胞将主要组织相容性复合物(MHC)分子中的捕获的抗原呈递给T淋巴细胞，引发和激活针对特异肿瘤抗原的CTL应答。在趋化因子梯度引导下，活化的CTL流入并浸润肿瘤组织。通过T细胞受体 (TCR)和新抗原MHC复合物之间的相互作用，CTL利用表面抗体特异识别、结合并杀死具有可识别抗原的肿瘤细胞。