[发明专利]一种利用重编程效应治疗白血病的方法

说明书

本发明提供了一种利用重编程效应治疗白血病的方法，该方法包括将重编程因子Oct‑4、Sox‑2、Klf4和c‑Myc(简称OSKM)导入白血病细胞的步骤；或者是利用重编程小分子体外培养的步骤。促使白血病细胞启动重编程过程，从而引起白血病细胞凋亡，达到体外清除白血病细胞的目的；为日后临床治疗白血病提供新的思路与方法。

本申请是分案申请，原申请的申请号为201610280410.5，申请日是2016年04月28日，发明名称为：一种利用重编程效应治疗白血病的方法。

技术领域

本发明涉及一种利用重编程效应治疗白血病的方法。

背景技术

体细胞重编程(somatic cell reprogramming)是指运用特定的方法将已经分化的体细胞逆转回到多能性或全能性状态的过程。2006年日本科学家山中伸弥(ShinyaYamanaka)证实过表达4个转录因子OSKM(Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc)能够使分化细胞重新获得多能性，这种细胞与胚胎干细胞具有十分类似的生物学特性，他把其命名为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)，并借此获得了2012年的诺贝尔生理医学奖。iPS技术自建立以来，在基础研究、发病机制、药物筛选及临床治疗等领域拥有十分广泛的应用前景。

早期的iPS技术主要运用逆转录或慢病毒的手段启动外源性重编程因子OSKM的表达。考虑到直接逆转录病毒感染会增加体细胞的突变，并且在iPSCs中直接整合到基因组中的病毒载体会随着细胞的分化而表达，最终影响iPSCs的应用和研究，针对重编程因子的诱导方法，科学家开发了多种非整合的iPSCs诱导方法。在DNA水平，科学家运用episomal，仙台病毒，转座子等技术实现了OSKM的诱导表达，但这些方法的重编程效率各不相同，并需要多次传代才能获得无携带载体的iPSCs。在RNA水平，Warren等将体外转录的OSKM的mRNA直接导入成纤维细胞获得iPSCs，此方法有一定的技术难度并需要多次转染，但能有效获得无携带载体的iPSCs。在蛋白质水平，Kim等利用细胞穿透肽将OSKM导入细胞内，成功获得人肾成纤维细胞来源的iPSCs，这种方法完全不借助遗传物质，但诱导效率比较低。另外，在重编程体系中加入小分子化合物，通过抑制或激活某些信号通路可以显著提高重编程的效率，甚至多种小分子能够替代经典重编程因子实现重编程。上述基因组非整合的方法，极大地推动了iPSCs的临床级应用前景。

虽然正常细胞在体内能有效的重编程为iPS细胞，但肿瘤细胞是否能在体内进行重编程至iPS细胞，目前还未有研究报道。与恶性肿瘤相似，iPS细胞的产生受肿瘤抑制基因如P53和Rb通路的抑制，重编程因子中C-MYC和KLF4均为著名的促癌因子。而且已有研究表明，正常细胞在小鼠体内重编程后，能形成肿瘤。因而在肿瘤发生和体细胞重编程之间存在着一定的相似性。相比于正常体细胞，肿瘤细胞的重编程较难，效率极低，但机制尚不明确。

白血病是血液系统的恶性肿瘤，据统计，我国白血病的发病率在各种肿瘤中排名第六，小儿肿瘤中排名第一。按起病的缓急以及细胞类型，白血病可分多种类型。目前体内清除白血病细胞主要是通过靶向药物化疗或免疫疗法。但并未有一种广谱性的疗法用于治疗多种白血病。白血病细胞成功重编程为iPS细胞的案例较少，说明白血病细胞难以进行有效的重编程，但其机制并未报道。在诱导重编程过程中，由于遗传及表观遗传修饰发生剧烈变化，部分细胞容易走向死亡。在我们的研究中发现，白血病细胞在重编程过程中，绝大部分细胞发生凋亡，这和白血病细胞难以形成iPS细胞有着直接的关系。利用白血病细胞这一特性，结合重编程技术，或许能为白血病的治疗提供新的思路与方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是利用重编程效应，在体内外选择性地清除白血病细胞。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种诱导因子(即重编程因子)Oct-4、Sox-2、Klf4和c-Myc(简称OSKM)用于在体内或体外促进白血病细胞凋亡的用途。