[发明专利]一种液质联用定量检测血浆中新型酰腙类抗心衰药物浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用定量检测血浆中新型酰腙类抗心衰药物(AF‑HF001)浓度的方法。采用液液提取技术完成对小鼠血浆样本的预处理，运用液相色谱‑质谱联用技术检测样品中AF‑HF001的含量。该方法依据生物样品定量分析方法验证指导原则验证，方法符合规范。该方法重现性好，分析时间短，能完成AF‑HF001及相关化合物在小鼠血浆中的含量检测要求，适合高通量分析，可用于AF‑HF001及相关化合物的药代动力学研究。

技术领域

本发明属于生物分析领域，具体涉及一种液质联用定量检测血浆中新型酰腙类抗心衰药物浓度的方法。

背景技术

心力衰竭是指由于心脏发生功能性障碍，导致心脏循环发生障碍，从而集中表现为肺或腔静脉淤血等的疾病。心衰多为各种心脏疾病发展到终末阶段的表现，严重威胁着人类的健康，影响着人类的生活质量。治疗心力衰竭的药物的研究一直是医药学关注的焦点。传统心力衰竭药物存在着广泛的副作用，因此，新型抗心衰药物是目前研究的热点。通过高通量筛选，我们发现了一种对心肌肌球蛋白具有激动作用的潜力小分子化合物，具体结构如I所示。其AC₄₀(肌节纤维ATP水解酶提高40％时的药物浓度)为6.7μmol/L，具有明显的心肌肌球蛋白激动作用。在特菲拉丁诱导建立斑马鱼心衰模型中，该药物化合物表现出明显降低心脏扩大率，并且血流动力学表现出一定药效作用，给药3h心输出量和血流速度增加。通过正常大鼠离体心脏模型，发现并证实了AF-HF001在体外能够安全有效的提高心肌收缩力并产生更大心脏搏出量。因此，AF-HF001为具有抗心力衰竭作用的药物小分子，开展相关体内代谢检测，开发合理的分析方法具有重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种重现性好、灵敏度高、分析速度快的检测血浆中小分子药物AF-HF001浓度的方法，此法可用于药物代谢动力学研究，为其临床前及临床研究提供方法参考。

技术方案：如本发明所述的一种液质联用定量检测血浆中AF-HF001浓度的方法，包括以下具体步骤：

(1)在指定时间点抽取小鼠血浆样品，置于冰箱中冷冻保存。

(2)使用液相色谱-质谱联用技术，进行小鼠血浆样品检测。

(3)配制系列质量浓度样品，制备标准曲线，以色谱峰面积为纵坐标，样品中药物的质量浓度为横坐标，进行线性回归，获得回归方程。

(4)将步骤(2)中所测得的小鼠血浆中AF-HF001峰面积代入步骤(3)中所得回归方程，计算得小鼠血浆样品中AF-HF001的实际质量浓度。

优选地，所述步骤(1)中取血方式为眼眶取血、尾静脉取血或开胸取血中任一，取血后置于肝素钠试管中高速离心，取上层清液置于冰箱中冷冻保存。

优选地，所述步骤(2)中检测使用的小鼠血浆样品，应为所述步骤(1)中所得血浆样品经有机试剂萃取处理所得。

优选地，所述步骤(2)中色谱条件选用C18色谱柱，选用0.1％甲酸-水/乙腈作为流动相，梯度洗脱方式洗脱，柱温30-40℃，流速为0.1-1mL/min。

优选地，所述步骤(2)中质谱条件采用电喷雾电离，正离子检测模式。采用MRM模式进行离子定量分析。

优选地，所述步骤(3)中系列质量浓度样品的配制方法应以药物加入空白小鼠血浆中后，按步骤(2)中相同的样品处理方法处理所得。

更优选地，血浆样品选用乙腈、乙酸乙酯、三氯甲烷这三种有机试剂中任一或组合萃取，并可进一步选用三氯乙酸沉淀蛋白，取有机层，弃水相及其他沉淀。所取清液挥去有机相后，以流动相溶液复溶，取上清置于-80℃冰箱中冷冻保存。

更优选地，色谱条件选择在20min以内，乙腈比例在30-95％的范围内开展梯度洗脱。