[发明专利]一种单核苷酸多态性的比色检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201810552198.2 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108753925A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 邢淑;赵超;徐皖星;徐梦佳;徐小军;付盼 | 申请（专利权）人： | 中国科学院宁波材料技术与工程研究所;中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6827 | 分类号： | C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 北京元周律知识产权代理有限公司 11540 | 代理人： | 潘欣欣 |
| 地址： | 315201 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 标准对照 混合溶液 光谱信息 单核苷酸多态性 金纳米粒子溶液 比色检测 序列互补 比色检测试剂盒 杂交 纳米金粒子 序列合成 试剂盒 比对 加热 申请 | ||
1.一种单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)获得待测DNA片段的无变异标准对照；
2)根据所述标准对照的序列合成PNA探针，所述PNA探针与所述标准对照的序列互补；
3)获得金纳米粒子溶液；
4)将所述PNA探针与所述标准对照杂交，后与所述金纳米粒子溶液混合得到第一混合溶液；将所述PNA探针与待测DNA片段进行杂交，后与所述金纳米粒子溶液混合得到第二混合溶液；
5)加热所述第一混合溶液和所述第二混合溶液，分别获取第一混合溶液的第一光谱信息和第二混合溶液的第二光谱信息；
6)比对第一光谱信息和第二光谱信息。
2.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述第一光谱信息包括颜色、紫外可见光谱、波长650nm处吸光度与波长520nm处吸光度的比值中的至少一种；
所述第二光谱信息包括颜色、紫外可见光谱、波长650nm处吸光度与波长520nm处吸光度的比值中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述PNA探针的链长不小于10个碱基。
4.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述金纳米粒子为13nm金纳米粒子。
5.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述步骤4)中，PNA探针与标准对照杂交时，PNA探针与标准对照的物质的量的比为3：(3.5-6)；
所述步骤4)中，PNA探针与待测DNA片段杂交时，PNA探针与待测DNA片段的物质的量的比为3：(3.5-6)。
6.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述第一混合溶液中，PNA探针与标准对照杂交得到的双链浓度为0.5-5μM；
所述第二混合溶液中，PNA探针与待测DNA片段杂交得到的双链浓度为0.5-5μM。
7.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述第一混合溶液和所述第二混合溶液中，金纳米粒子的浓度为2.5-20nM。
8.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性的比色检测方法，其特征在于，所述步骤5)中的加热温度为80-100℃，加热时间为30s至1min。
9.一种单核苷酸多态性的比色检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
1)待测DNA片段的无变异标准对照；
2)PNA探针，所述PNA探针与所述标准对照的序列互补；
3)金纳米粒子。
10.根据权利要求9所述的单核苷酸多态性的比色检测试剂盒，其特征在于，所述金纳米粒子是13nm金纳米粒子。
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