[发明专利]一种重组病毒载体、疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明属于免疫技术领域，公开了一种针对SFTS病毒的重组病毒载体、疫苗及其制备方法与应用。本发明所述重组病毒载体为含有编码发热伴血小板减少综合征病毒糖蛋白Gn/Gc的DNA分子的病毒载体。进一步所述重组病毒载体与病毒转录复合物等转染宿主细胞收集具有感染性的病毒颗粒即活病毒载体疫苗。与现有技术相比，本发明所述疫苗具有易于培养、高效的感染性、易使用、能刺激机体产生强烈的细胞免疫反应和体液免疫反应及较强的粘膜免疫反应、安全性好等优势。

技术领域

本发明属于免疫技术领域，具体涉及一种重组病毒载体、疫苗，尤其是一种针对发热伴血小板减少综合征的重组病毒载体、疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

发热伴血小板减少综合征(SFTS)，是一种新出现的出血热，其首个病例出现在中国农村地区。SFTS的病原体为SFTS病毒(SFTSV)，是一种新型的布尼亚病毒科白蛉病毒属病毒，通过蜱虫叮咬传播。SFTS病毒颗粒呈球形，直径约80-100nm，外有脂质包膜，表面有长5-10nm的多肽棘突。SFTS病毒基因组由三个小、中、大负链RNA片段组成。中RNA片段有3378个核苷酸，其包含了编码糖蛋白Gn/Gc的1073个氨基酸的单个开放阅读框，这对病毒组装、病毒颗粒的形成及粘附至新的靶细胞上均有至关重要的作用。

SFTS以发热和呼吸道或消化道症状急性起病，随后出现血小板和白细胞数急性下降。SFTS的发病机制目前尚未完全清楚。布尼亚病毒科病毒常见的致病特点是：能抑制宿主的免疫反应，以病毒的快速复制和多器官衰竭为特征。自2010年首次报道以来，在我国绝大多数省份都有病例发现，平均死亡率为7.3％。2011-2012年间，中国共有2047例SFTSV感染(其中有129例死亡)，主要分布在中国东部和中部的206个县。河南、湖北和山东的病例数最多，分别占总数的48％、22％和16％。疾病流行区的农民是主要的风险人群，中国97％的SFTS患者为居住在森林和丘陵地区或在农田工作的农民，许多患者在发病前7-9天曾被蜱虫叮咬。血清监测提示丘陵地区1.0％-3.8％的检测人群有SFTSV抗体，这表明SFTSV已经在中国广泛的传播，并且仅很小一部分感染人群发病。SFTS的发病率从湖北的千分之0.03至山东的千分之0.05不等。2012年日本和韩国也曾有此病报道。

由于目前尚无SFTS的特异性治疗，所以应尽早对SFTS患者开展对症治疗和支持治疗。卧床休息，流质或半流质饮食，补充充足的水分。如果患者不能进食或处于危重状态，必需补充能量和水分以确保患者水电解质平衡，尤其对于低钠血症患者。

目前已经批准利巴韦林用于几种病毒感染的治疗，包括布尼亚病毒属裂谷热病毒和克里米亚刚果热病毒。虽然，利巴韦林在体外试验中可抑制病毒活动，但是在重症或非重症患者住院期间其对血小板数量或病毒载量无明显影响，所以利巴韦林在治疗SFTS病毒感染上作用甚微。

目前疫苗在多种病毒所致疾病的治疗中有着重要作用，例如汉坦病毒、巨细胞病毒和狂犬病病毒。其作用机制包括中和作用、激活补体、抗体依赖的细胞毒性和调理作用。给予患者中和抗体可降低病毒载量，预防病毒传播，同时可能降低预后不良的风险。

疫苗曾经的定义为：针对疾病产生免疫力的疫苗是灭活或减毒的病原体，即疫苗是由病原体制成。随着新型疫苗的发展，如亚单位疫苗、活载体疫苗和核酸疫苗等疫苗的出现，疫苗已不是完整的病原体，灭活和减毒的概念亦模糊不清。现代疫苗的定义是：疫苗是针对疾病的致病原或其相关的蛋白(多肽、肽)、多糖或核酸，以一种或多种成分直接或通过载体经免疫接种进入机体后，能诱导产生特异的体液和(或)细胞免疫，从而使机体获得预防该病的免疫力。

申请号为201510181127.2的中国专利公开了密码子优化的严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白基因及其核酸疫苗。申请号为CN201610324251.4的中国专利公开了携带tPA信号肽及密码子优化的SFTSV糖蛋白Gn基因序列及其核酸疫苗。但是由核酸疫苗引发的体液和细胞免疫达不到理想的状态和人们对其安全性的担忧使核酸疫苗的发展面临巨大问题。