[发明专利]一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。本发明的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测血清中孕酮 P 含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

背景技术

孕酮（P）孕酮是类固醇生物合成过程中生成的第一个具有生物活性的化合物，它由肾上腺皮质、男性睾丸，女性卵巢和胎盘生成，主要代谢产物为孕二醇-3-葡糖苷酸。LH作用于黄体调节孕酮的合成和分泌。随着LH在月经周期中期达到高峰，黄体开始发育，孕酮的水平也随之增长。如果怀孕，孕酮水平则随着其主要来源胎盘的发育而持续增长，并贯穿整个妊娠期。血液循环中的孕酮结合蛋白主要有类固醇结合蛋白、白蛋白、性激素结合蛋白，其中主要与白蛋白和类固醇结合蛋白结合，具有生物活性的游离型孕酮仅占总孕酮的2.5~3%。临床上检测孕酮主要用于确认排卵、评价黄体功能缺失，检验诱导排卵过程的有效性等。目前认为，结合孕酮的检测是除了子宫内膜活检以外可以正确评价黄体功能的一种方法，甚至可以替代子宫内膜活检。正常妊娠和异位妊娠时孕酮水平都会升高。血清孕酮的测定也可用于替代疗法的疗效监测和妊娠早期自发性流产危险性的评估。

用于体内孕酮测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记孕酮半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。

目前已有多件磁微粒化学发光方法检测孕酮的专利申请，如申请号（201110257759）的专利申请是化学发光板的方法，板间差异较大；申请号（201511019364）的专利申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记孕酮抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。

发明内容

本发明要解决的问题是提供孕酮的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本发明公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的孕酮的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。

优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；

所述碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物为碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，其中孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和孕酮的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质；

所述生物素标记的孕酮抗体为生物素和孕酮抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，其中孕酮抗体为小鼠单克隆抗体；

所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为DANAZOL，所述缓冲液为20mM～200mM Tris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；