[发明专利]一种Gaucher慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种Gaucher慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，其中，所述慢病毒载体还包括GBA基因。本申请改造后的慢病毒载体的基础上特异地连入GBA基因，能够在保障安全性的同时实现更高效的基因传递，使得GBA基因在转基因相关细胞中的表达量明显增加，能够更高效的完成Gaucher基因治疗过程中正常基因的传递。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种Gaucher慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，尤其涉及一种应用改良后的慢病毒载体优化表达GBA基因用于制备治疗戈谢病的药物。

背景技术

戈谢病(Gaucher)是一种影响人体多处器官和组织的遗传病，由于GBA基因突变大大降低或消除β-葡糖脑苷脂酶的活性，没有足够的β-葡糖脑苷脂酶，葡萄糖脑苷脂和相关物质在细胞内的达到毒性水平，组织和器官受到这些物质的异常积累和储存的损害，导致戈谢病的特征。不同患者的症状和体征差异很大，I型戈谢病是戈谢病最常见的形式，I型戈谢病也被称为非神经型戈谢病，该类型患者的中枢神经系统通常不受影响。该疾病的特征从轻度到严重，症状可以出现在从儿童到成年的任何时间，主要症状和体征包括肝脾肿大，贫血，易擦伤，这是由血液中血小板含量减少引起的，还包括肺部疾病，骨异常、骨疼痛，骨折和关节炎。II和III型戈谢病被称为神经型戈谢病，它们影响中枢神经系统。除了上述的症状和体征，II和III型戈谢病可导致异常眼球运动，癫痫发作和脑损伤。II型戈谢病始于婴儿期，常会引起危及生命的医疗问题，III型戈谢病虽然也会影响神经系统，但它比II型恶化得慢。

戈谢病的另一种形式被称为心血管类型，因为它主要影响心脏，导致心脏瓣膜钙化。心血管型戈谢病患者可能会有眼部异常，骨骼病变和脾轻度肿大的症状。戈谢病在一般人群中的发病率是1/10万～1/5万。I型是最常见的疾病形式；它在阿什肯纳齐(东欧和中欧)犹太人后裔比在其他种群的人发病率更高。这种疾病在这类犹太人中的发病率是1/5万～10/1万。其他形式的戈谢病是不常见的，在阿什肯纳兹犹太人后裔中发病率更低。

Gaucher是单基因突变造成的β-葡糖脑苷脂酶缺陷的疾病，因此基因治疗方法理论上可以实现对该病的彻底治疗。造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)与间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多项特征使其成为基因治疗中潜在的“运输工具”，HSCs以及MSCs可从血液或者骨髓中获得，并且具有分化成为一系列体细胞以及更新各种组织细胞的能力，并且可以经过交互校正(cross correction)方式治疗周围细胞。

目前国内外应用病毒载体进行基因传递的基因治疗方法虽然有许多，但是不同病毒载体，甚至相同载体的不同制备方法引起的基因传递效率差异明显，而基因传递效率将直接影响疾病的治疗效果。现在大多应用细胞治疗对遗传病进行治疗的方法均存在效率过低以及仅针对血液干细胞进行修饰，使得疾病治疗的临床效果始终达不到预期，因此急需能够最大程度上提高病毒基因传递效率以及修饰多种干细胞的方法来提高遗传疾病的疗效。

AVROBIO公司近日宣布完成了6000万美元的B轮融资，用于推进AVROBIO慢病毒平台的多种基因疗法，包括正在法布里病(Fabry diseases)I期临床试验中的AVR-RD-01，以及另外三种基因疗法治疗其他溶酶体贮存症，包括戈谢病(Gaucher disease)，胱氨酸病(cystinosis)和庞贝氏病(Pompe disease)。以腺相关病毒(adeno-associated viral，AAV)为载体的动物实验已取得了一些进展，McEachern等用注射带有人GBA基因的AAV8载体到Gaucher老鼠上，取得了比较好的试验结果。

但AAV载体在人体会产生宿主免疫反应，注入不同组织免疫反应的程度也不同，具体因素和危害尚不明确，这将是其应用于临床的关键所在。研究人员已找到了志愿者，针对此的临床试验正在进行中。

发明内容