[发明专利]一种苯并芘免疫原的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种苯并芘免疫原，结构式如式(Ⅰ)所示，

2.如权利要求1所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，合成路线如式(Ⅱ)所示，

包括以下步骤：

(1)用苯并芘标准品进行碘代反应，室温下反应48h，得中间产物6-碘苯并芘；

(2)步骤(1)中所得6-碘苯并芘进行Heck偶联反应，在120℃的条件下反应15h，分离净化，得BaP半抗原；

(3)通过肟化反应将步骤(2)中所得BaP半抗原的羰基羧基化，得BaP羧基衍生物，以BSA为载体蛋白，经活化酯法将上述BaP羧基衍生物与BSA偶联，即得。

3.如权利要求2所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，所述苯并芘免疫原的具体制备过程为：

(1-1)取500mL三口圆底烧瓶，分别加入0.4g苯并芘、0.42gNIS、10g酸性氧化铝和30mL甲苯，室温搅拌反应48h，并通过展开剂为甲基叔丁醚:石油醚＝1:25(v/v)的薄层色谱监测上述反应至原料消失为止；再将上述反应产物经过滤后合并有机相，分别用饱和亚硫酸钠溶液、饱和NaCl溶液和超纯水各萃取三次，将所述有机相经无水MgSO₄干燥、过滤、减压浓缩和重结晶提纯，得黄色粉末状固体物；

(2-1)向100mL单口烧瓶中分别加入0.27mg步骤(1-1)中黄色粉末状固体物、0.01g醋酸钯和0.02gLiCl，加入20mLDMF溶解，再依次加入70μL4-戊烯-2-醇和200μL三乙胺，120℃搅拌反应15h，并通过展开剂为甲基叔丁醚:石油醚＝1:2(v/v)的薄层色谱监测上述反应至反应完全；再将反应产物冷却至室温并加入120mL甲苯，分别用饱和NaCl溶液和超纯水各萃取三次，所述有机相经无水MgSO₄干燥、过滤和减压浓缩得粗产品，再经淋洗液为甲基叔丁醚:石油醚＝1:2(v/v)的硅胶色谱柱分离净化，得浅黄色粉末状产物；

(3-1)取0.12g步骤(2-1)中浅黄色粉末状产物、0.24g羧甲氧基胺半盐酸盐溶于15mL干燥吡啶中，在避光条件下震荡反应，并通过展开剂为氯仿:甲醇＝9:1(v/v)的薄层色谱监测上述反应至反应完全；待反应完全后，取0.54g硼氢化钠溶于4.5mL超纯水中，加入到上述反应液内，室温震荡反应5h，氮吹后的残渣分别用pH2.0盐酸溶液、蒸馏水洗涤两次，60℃烘箱中烘干，得黄色固体产物；再称取0.823g上述黄色固体产物溶于0.5mLDMF中，将0.023gN-羟基琥珀酰亚胺、0.412g二环己基碳二亚胺溶解于0.5mLDMF后，加入到上述溶液中4℃搅拌反应8h；再在6000rpm、4℃下高速离心20min，取上清液加入5mLBSA溶液，4℃下搅拌反应过夜；重复离心，将上清液用0.01M、pH7.40磷酸盐缓冲液透析3d，-20℃下保存，即得。

4.如权利要求3所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，步骤(1-1)中所述黄色粉末状固体物为6-碘苯并芘，且产率为76.2％。

5.如权利要求3所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，步骤(1-1)中所述重结晶提纯的溶剂为二氯甲烷和石油醚的混合物。

6.如权利要求3所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，步骤(2-1)中所述浅黄色粉末状产物为苯并芘半抗原，分子式为C₂₇H₂₀O，且产率为86.2％。

7.如权利要求3所述苯并芘免疫原的制备方法，其特征在于，步骤(3-1)中，所述黄色固体产物为BaP羧基衍生物，结构式为BaP-COOH。

8.如权利要求1所述苯并芘免疫原在制备BaP人工多克隆抗体中的应用。

9.如权利要求1所述苯并芘免疫原作为痕量BaP免疫分析检测的用途。