[发明专利]一种Sanfilippo B综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种Sanfilippo B综合症的慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，其中，所述慢病毒载体还包括NAGLU基因。本申请改造后的慢病毒载体的基础上特异地连入NAGLU基因，能够在保障安全性的同时实现更高效的基因传递，使得NAGLU基因在转基因的大脑相关细胞中的表达量明显增加，能够更高效的完成Sanfilippo B综合症基因治疗过程中正常基因的传递。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种Sanfilippo B综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，尤其涉及一种应用改良后的慢病毒载体优化表达NAGLU基因用于制备治疗戈谢病的药物。

背景技术

Ⅲ型B类黏多糖积贮症综合症(Mucopolysaccharidosis(MPS)type III B，也称Sanfilippo B综合症)，此疾病会导致渐进性的认知功能障碍。这种疾病是由于只有部分降解的硫酸乙酰肝素寡糖堆积所造成的，Sanfilippo B的相关基因NAGLU突变，导致了α变N乙酰葡萄胺糖苷酶催化活性的失去。Sanfilippo B综合症的症状和病理特征与Sanfilippo-A类似，并且硫酸乙酰肝素寡糖的堆积不仅影响了组织和器官，尤其是CNS中的神经元和非神经元细胞，而且还会导致CNS的二级病理学特征的出现，包括大量的代谢损伤，神经炎症，氧化应激和神经性退化，不仅如此，对外周神经系统(PNS)也会造成深远的影响。SanfilippoB综合症多发于儿童，2-4岁之前症状不太明显，之后病情会有明显地发展，最终死亡。

Sanfilippo B是单基因突变造成的溶酶体堆积紊乱疾病(lysosomal storagedisorders，LSDs)，涉及基因NAGLU，因此基因治疗方法理论上可以实现对该病的彻底治疗。在脑部直接注射携带正常NAGLU基因的毒载体可以直接对基因缺陷细胞进行脑内转染，进而修复各种脑部细胞，分泌出所需要的硫酸胺酶，减少硫酸乙酰肝素的堆积，从而进行下一步的降解，并可以进过交叉校正(cross correction)方式修复周围细胞乃至整个脑部的细胞。体外对病毒载体进行修饰，直接注射入脑，此方法方便快捷，成本低廉，适用性很高，具有较好的临床基因治疗应用前景。

目前国内外应用病毒载体进行基因传递的基因治疗方法虽然有许多，但是不同病毒载体，甚至相同载体的不同制备方法引起的基因传递效率差异明显，而基因传递效率将直接影响疾病的治疗效果。现在大多应用细胞治疗对遗传病进行治疗的方法均存在效率过低以及仅针对血液干细胞进行修饰，使得疾病治疗的临床效果始终达不到预期，因此急需能够最大程度上提高病毒基因传递效率以及的方法来提高遗传疾病的疗效。

Abeona Therapeutics Inc.(纳斯达克股份代号：ABEO)是一家临床阶段的生物制药公司，致力于为危及生命的罕见遗传病研发基因疗法。该公司宣布，欧洲药物管理局(EMA)罕见医学产品委员会向Abeona用于治疗山菲利普综合症B型(MPS IIIB)儿童的基因疗法项目授予指定罕见病药物(EMA/OD/226/16)资格。此基因治疗项目此前已在美国获美国食品及药物管理局(FDA)的指定罕见病药品并获得指定罕见儿科疾病资格，作为FDA优先审核凭证(PRV)程序的先决条件。FDA已批准试验用新药(IND)进行1/2期临床试验，并预计从2017年第二季开始接受临床试验患者登记。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种Sanfilippo B综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述Sanfilippo B综合症慢病毒载体转染效率更高，稳定性更强，安全性更好。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种慢病毒载体，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，具体改造方式如下：